Тамоксифен на пкт: Тамоксифен в бодибилдинге — как принимать

советы и рекомендации ~ Yetsbody.ru

Фото: Как правильно принимать Тамоксифен

Тамоксифен – лекарственное средство в таблетированный форме, которое препятствует работе эстрогеновых рецепторов. Антиэстроген может иметь еще одно название – Нолвадекс. Изначально препарат применялся в медицинской практике для лечения онкологических болезней, возникших в молочных железах у пациенток, сейчас является довольно актуальным вопрос — как принимать тамоксифен в бодибилдинге, поскольку он преимущественно используется представителя спортивных дисциплин на курсе анаболических и андрогенных веществ или же при прохождении послекурсовой терапии.

Тамоксифен как бустер тестостерона способен значительно увеличивать концентрацию основного мужского полового гормона в организме атлета, поскольку он относится к антиэстрогенам. Если принять во внимание статистические данные, то первичные показатели концентрации природного тестостерона в организме в случае употребления тамоксифена в дозировке по 20 мг ежедневно на протяжении 10 дней показывают, что в крови уровень тестостерона возрастает на 42%.

Если увеличить курс до полутора месяца, то уровень эндогенного тестостерона способен увеличиться до 83%. Подобные статистические данные подтверждают то, что препарат характеризуется высокой эффективностью, что выгодно его выделяет на фоне других препаратов.

Дозировки антиэстрогена во время пкт

Фото: Как правильно принимать Тамоксифен

В спортивной практике тамоксифен считается одним из наиболее востребованных антиэстрогенов, поскольку его доступно приобрести во многих аптеках, да и его стоимость довольно демократичная. Стоит заметить, что практика его применения продолжается уже не один десяток лет.

Данный антиэстроген воздействует на все эстрогеновые рецепторы в организме, блокируя их работу. Другой же препарат из одной и той же группы веществ – Кломид оказывает воздействие исключительно на эстрогеновые рецепторы, размещенные в гипофизе и яичках. Детальная схема того, как принимать тамоксифен на послекурсовой терапии в зависимости от того, насколько сложным был курс, указана ниже:

  • после легкого курса стероидов тамоксифен принимается на протяжении 30 дней – первые 15 дней по 20 мг ежедневно, далее 15 дней по 10 мг активного компонента;
  • по завершению среднего курса анаболических препаратов антиэстроген используется 45 дней – 30 дней по 20 мг, последующие 15 по 10 мг;
  • тяжелый курс требует пкт на протяжении 45 дней со следующими дозировками антиэстрогена – 15 дней по 40 мг препарата, далее 15 дней по 20 мг тамоксифена и в завершении 15 дней по 10 мг;
  • после очень тяжелого курса анаболических и андрогенных средств тамоксифен применяется на протяжении 45 дней в дозировках – 3 дня по 80 мг активного компонента, 12 дней по 40 мг, далее следуют 15 дней по 20 мг, а в завершении пкт принимается 15 дней по 10 мг антиэстрогена.

Важна деталь – тамоксифен нельзя использовать во время послекурсовой терапии после приема анаболических и андрогенных средств, характеризующихся прогестагенной активностью – различных нандролонов и тренболонов, поскольку данный антиэстроген может активизировать ее. Также следует разобрать вопрос – как принимать тамоксифен до еды или после. Таблетки антиэстрогена можно принимать в любое время неразжевывая, независимо от приемов пищи, при этом запивая обильным количеством жидкости.

Как грамотно использовать тамоксифен на курсе

Фото: Как правильно принимать Тамоксифен

Многие спортсмены интересуются, как принимать тамоксифен после курса, поскольку подобная схема использования препарата позволяет эффективно предотвратить распространенные побочные реакции от приема анаболических и андрогенных стероидов, вызванных ароматизацией – гинекомастия, чрезмерная удерживание воды в тканях.

В таком случае, антиэстроген используется во время прохождения всего курса стероидов, курс начинается на второй неделе применения анаболических средств. Оптимальная дозировка тамоксифена равна 10-20 мг ежедневно. Однако стоит напомнить, что для такого случая специально используются ингибиторы ароматазы, также и провирон. Тамоксифен принимается в крайнем случае, когда невозможен прием блокаторов ароматазы.

Но также подобная схема использования антиэстрогена и/или ингибиторов ароматазы имеет немалое количество противников в спорте, поскольку на курсе они могут замедлять прирост мышечной массы и увеличение силовых показателей. Данный эффект связан с тем, что прием на курсе тамоксифена и/или ингибиторов ароматазы препятствует задержке жидкости. Но нужно понимать, что рост мускулатуры все равно продолжается, просто он не так выражен, поскольку в отличие от задержания воды, мышечная масса качественно и стабильно наращивается на протяжении всего курса. В итоге, из-за меньшей задержки жидкости феномен отката после завершения курса становится менее выраженным.

Также стоит рассмотреть случай того, как принимать тамоксифен при гинекомастии. Если гинекомастия у спортсмена уже сформировалась, то необходимо ежедневно принимать тамоксифен в дозировке по 20-40 мг. Как показали различные исследования, суточная дозировка тамоксифена равная 20 мг позволяет в кратчайшие сроки избавиться от гинекомастии, поэтому в большинстве ситуаций 20 мг активного компонента оказывается вполне достаточно.

Одним из наиболее часто задаваемых вопросов является – как понять что тамоксифен не действует. Это зависит от того, после какого именно курса используется антиэстроген. Препарат влияет на выработку тестостерона, поэтому сигналом что тамоксифен не работает может быть угнетение половой функции. Если препарат используется для устранения имеющейся гинекомастии, то обострение ее симптомов может быть знаком, что следует пересмотреть дозировки.

Также следует отметить, что на курсе тамоксифена может наблюдаться «вспышка» — обострение всех симптомов активности эстрогенов в организме, при продолжении приема антиэстрогена она постепенно уменьшается. Многие спортсмены расценивают это как сигнал к отмене препарата. Поэтому не нужно искать способы, как понять что тамоксифен работает, действие препарата должно быть заметно уже на первой неделе курса, а также в случае необходимости лучше всего проконсультироваться с тренером или спортивным врачом.

ПКТ — Восстановление после курса стероидов

После окончания курса стероидов, нужно минимизировать потери в мышечной массе и восстановить свой естественный уровень тестостерона.

Запомните: когда вы оканчиваете курс анаболических стероидов – вы будете худеть всегда. Всегда терять мышечную массу, какой бы ПКТ вы не использовали, какие бы супер методики вы не использовали, вы всегда будете сжигать часть набранной мышечной массы. Почему?

Дело в том, что мужской организм в среднем вырабатываем в сутки +-5мг тестостерона – это одна таблетка метана. Допустим у вас на курсе 700 мг метана в неделю, в день получается 100 мг метана, а естественная дозировка вырабатывается 5мг.

Вот такое преимущество человек получает на химии, дозировка половых гормонов в 20 раз больше чем естественная дозировка обычного человека. Организм не может обеспечить такие количества прироста тестостерона. Вот почему когда человек слазит с курса стероидов, он всегда теряет часть набранной массы.

Вывод: на ПКТ не стоит задача сохранить ваши набранные на курсе мышцы, на ПКТ стоит задача не разрушить их ещё больше чем предусмотрено природой. Когда человек начинает неумело экспериментировать со своей гормональной системой, или когда он дает большие избыточные нагрузки в тренажерном зале.

Нам нужно минимизировать потери

  • Чем больше дозы стероидов вы использовали на курсе, тем больше потери в мышечной массе и силе будут после курса (откат больше).
  • Чем более длительный по времени был курс использования анаболических стероидов, тем больше будет откат после курса.
  • Чем меньше вы используете дозы препарата вы используете во время курса, тем меньше у вас прирост, и потери соответственно меньше, точно так же и по срокам приема.

Уменьшить потери мышц на ПКТ

  • Нужно сконцентрироваться на том, чтобы вернуть естественный баланс половых гормонов. Чтобы была собственная выработка, а женские нужно понизить, потому, как после курса стероидов в результате ароматизации их будет больше.
  • Нужно добиться восстановление либидо, и сперматогенезом.
  • Привести в порядок состояние печени, чтобы билирубин был в норме,  для этого помогает кортизол.
  • Холестерин. Хорошее питание, много жирной рыбы, рыбий жир (омега-3) и следим за состоянием холестерина.
  • Снизить уровень кортизола. На курсе мы привыкли работать с очень высокой интенсивностью тренировки, а после курса стероидов эту интенсивность нужно снижать, чтобы понижать уровень кортизола.

Восстановление баланса гормонов

В мужском организме также находиться эстроген, и они находятся в определенной пропорции с тестостероном. Естественная пропорция от 1 к 200мг.
Все в нашей системе регулируется, если у вас много тестостерона, то свой собственный вырабатываться не начинает. Прежде чем поднимать свой натуральный уровень тестостерона, нужно дождаться пока закончится искусственный.  Для этого нужно учитывать сроки распада тех или иных препаратов.

Допустим после тестостерон энантата и сустанона нужно ждать ~2-3 недели.

Если в вашей системе много эстрадиола и пролактина, то они очень сильно тормозят выработку собственного тестостерона.

Препараты, которые помогают на ПКТ

Летрозол

Летрозол – против эстрадиола.

Летрозол – блокирует эстроген и стимулирует выработку собственного тестостерона. Опыты показывают что 0.5мг летрозола через 2 дня повышают уровень собственного тестостерона на 50%, а 2.5мг (1 таблетка) через 2 дня повышают на 75% уровень собственного тестостерона.

Прием летрозола

Когда и как начинать принимать летрозол. Есть два варианта использования ингибиторов ароматазы.

Во время курса – нужно использовать в той ситуации, когда у вас избыточная ароматизация, когда ваш организм конвертирует слишком много тестостерона в эстродиол. Увеличивается вероятность гинекомастии, ожирение по женскому типу и т.д.

Достинекс

Достинекс  — борется с пролактином. Дозировки такие же, как и у летрозола.

Что способствует более быстрому восстановлению тестостерона.

Более быстрое восстановление тестостерона защищает вас от таких последствий как гинекомастия, ожирение по женскому типу, плохая потенция.

Кломифен цитрат

Более слабый антиэстроген, но лучше стимулирует выработку тестостерона

Тамоксифен цитрат

Более сильный антиэстроген и хуже способствует выработке тестостерона.

Существуют препараты после которых на ПКТ тамоксифен лучше не использовать, это препараты с прогистогенной активностью:

Тамоксифен с этими препаратами лучше не принимать, потому как он увеличивает количество прогистогенных рецепторов, соответственно вы можете получить из-за этого много неприятных побочных эффектов.

Дозировка Тамоксифен цитрат

  • 1 день – 80мг
  • В течение недели по 40мг
  • Потом пару недель по 20мг

Кломид

Дозировка Кломид (кломифен)

  • 1 день – 200мг разделить на 4 приема по 50мг
  • После в течение недели используете повышенную дозировку в 100мг (2 таблетки по 50мг).
  • После этой недели переходите на пониженный прием кломида 50мг в день.
  • Общая продолжительность приема кломида +- 1месяц.

Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ)

ХГЧ это лютеинизирующий гормон, это тот препарат который заставляет ваши яички вырабатывать тестостерон. Но это вещь искусственная, поэтому после того как у вас в системе прекратили действовать стероиды ХГЧ работает плохо.

Хорионический гонадотропин человека лучше всего использовать в течение курса и после курса стероидов, для того чтобы ваши яички продолжали производить тестостерон.

Дозировка ХГЧ

  • 2000 ХГЧ через день в течение недели. Понедельник 2000, Среду 2000, Пятницу 2000.
  • Есть вариант использования по 500 единиц ХГЧ каждый день в течение 10 дней.

Провирон


  • Блокирует ароматизацию
  • Блокирует действие глобулина
  • Увеличивает либидо после курса стероидов

Дозировка провирона

  • 50 мг в день, разделить на два приема утром и вечером.

Карсил

Справляется со всеми основными задачами, связанными с печенью. Восстанавливают клетки печени и защищают их.

Дозировка карсила

  • 270мг в сутки — 3 раза в день по 90 мг длительность приема около 3 месяцев.

Для восстановления холестерина

  • Едим Омега-3, рыбий жир, Жирную рыбу.

Повышенное давление на ПКТ

Давление должно быть 140 на 90.

Для стабилизации давления существуют такие препараты как:

  • Эналалрил – 5мг в день
  • Метопролол – 50мг в день

Понижение кортизола

Основные катаболики это:

ПКТ Послекурсовая терапия. Основы восстановления тестостерона


Watch this video on YouTube

Как принимать тамоксифен в бодибилдинге?

Большинство спортсменов, которые начинают интересоваться спортивной фармакологией, задаются вопросом: что такое тамоксифен и для чего он нужен?

Данный препарат носит вспомогательную роль, он не имеет ярко выраженных свойств и многие пренебрегают им. Но это – большая ошибка.

Тамоксифен – что это?

Препарат «Тамоксифен» имеет еще и другое название. Его еще называют «Нольвадекс»

Тамоксифен – в народе просто «тамокс». В фармакологии это лекарство применяется женщинами. Оно гасит уровень эстрогена в организме и борется с раковыми опухолями молочной железы.

Но, как вы уже догадались, спортсмены начали использовать тамокс немного в других целях. Его следует применять во время курса стероидов. Тамоксифен позволяет  держать низкий уровень эстрогена, предотвращает появление гинекомастии у мужчин.

Для тех, кто не знает, гинекомастия – это опухание груди у мужчин, вследствие роста молочных желез. Простыми словами, мужская грудь становится похожей на женскую.

Преимущества препарата

Тамоксифен имеет ряд преимуществ:

  1. Низкая стоимость, по сравнению с аналогами.
  2. Высокая эффективность действия.
  3. Отсутствие побочных эффектов, при правильном использовании.
  4. Слабая токсичность препарата.
  5. Снижает уровень холестерина в организме.

Помимо этого, тамоксу причисляют множество функций, на подобие: увеличение силы, сжигание жира, прирост мышечной массы и т.д. На самом деле, это преувеличение и тамоксифен не выполняет ни одну из этих функций.

Недостатки препарата

Также тамоксифен имеет некоторые недостатки:

  1. Снижает производительность мужских яичек.
  2. Медленное действие препарата.
  3. Понижение инсулиноподобного фактора в организме.

Побочные эффекты

Тамоксифен имеет больше преимуществ, чем недостатков. Он довольно спокойный и безобидный препарат. Но, как и любое лекарство, его стоит правильно использовать, во избежание побочных эффектов.

Побочные эффекты тамоксифена:

  • Превышение дозировок вызывает повышенную температуру тела, тошноту.
  • Большие дозировки пагубно влияют на работу почек.
  • Длительное использование вредит зрению, может значительно его ухудшить.

Если тамоксифен использовать с умом и по инструкции, то никаких осложнений не будет, это очень «мягкий» препарат. Спортсмены, в большинстве случаев, не нарушают правил приема, а, следовательно, побочные эффекты встречаются крайне редко.

Тамоксифен в бодибилдинге

В бодибилдинге тамоксифен – очень популярное средство. Но проблема в том, что никто до конца не знает, когда его лучше всего начать принимать.

Мнения разделились:

  • Тамоксифен эффективен как ингибитор ароматазы.
  • Его лучше использовать как послекурсовую терапию (ПКТ).

Тамоксифен во время курса стероидов

Часть спортсменов используют тамоксифен по его прямому назначению – понижать уровень эстрогена в организме.

Схема очень простая: стероиды увеличивают уровень тестостерона, вместе с ним и повышается эстроген, а тамокс не дает ему это сделать.

Как результат: высокий уровень мужского гормона и низкий уровень женского.

Тамоксифен дешевый и в этом его плюс. Но его приходится пить ежедневно, а для некоторых это – большое неудобство. Более дорогим и эффективным аналогом для погашения уровня эстрогена является анастрозол. Этот препарат мощнее, эффективнее и его достаточно пить 1 раз в 4 дня. Но его стоимость – в 4 раза выше, чем у тамоксифена.

Тамоксифен – как ПКТ

Некоторые считают, что тамоксифен эффективен после курса.

Как это работает: в конце стероидного курса, спортсмен начинает применять тамоксифен, что позволяет яичкам работать быстрее и выделять собственный тестостерон.

В результате: собственная выработка мужского гормона нормализуется, за счет этого мышечная масса сохраняется.

Но вот в чем загвоздка. Прямая функция тамоксифена – это погашение уровня эстрогена в организме. А выработка собственного тестостерона – это уже вывод, который сделали сами спортсмены. Тем более, что среди его недостатков выделяют замедленную работу яичек. А значит, что использовать тамокс на ПКТ – неразумно, так как не доказана его эффективность на этой стадии.

Для ПКТ есть очень эффективный препарат – кломид, который отлично справляется со своей задачей. Правда, его стоимость в 2-3 раза выше, чем у тамоксифена, но и результат значительно лучше.

Как правильно принимать тамоксифен

Мы пришли к выводу, что тамоксифен наиболее эффективен непосредственно во время приема стероидов, а не после. Значит, использовать его необходимо на протяжении всего курса.

Правила использования:

  1. Начинаем применять тамоксифен через неделю, после старта курса стероидов. Связано это с тем, что первые признаки гинекомастии появляются не раньше, чем через 2 недели. Но лучше перестраховаться и начать его прием уже через неделю.
  2. Выпиваем 1 таблетку в день, больше не требуется. Даже 20мг справляются со своей задачей на все 100%.
  3. После окончания приема стероидов, продолжаем пить тамоксифен еще 2 недели. Так как на протяжении этого времени в организме поддерживается высокий уровень тестостерона, его нужно контролировать тамоксом.

Фото до и после приема препарата

Отзывы о тамоксифене

Тамоксифен очень спорный препарат, а поэтому и отзывы о нем разнообразные:

  • По мнению некоторых опытных спортсменов, тамоксифен – вчерашний день. Сейчас есть более современные и эффективные препараты, поэтому нет смысла его использовать.
  • Большинство атлетов, использующих тамоксифен, как ингибитор ароматазы, довольны им. По их мнению, тамокс прекрасно блокирует прирост эстрогена и справляется со своей задачей.
  • Все, кто предпочитают тамоксифен, сошлись во мнении, что побочные эффекты встречаются крайне редко или же совсем не проявляются. Этот препарат очень «мягкий» и не вредит организму.
  • При использовании большого количества стероидных препаратов, все же рекомендуют использовать анастрозол, как блокиратор эстрогена. Данный препарат мощнее, но и дороже.
  • Как ПКТ, тамоксифен довольно слаб, о чем и утверждают спортсмены. После стероидного курса, он хорошо действует лишь в связке с провироном.
  • Тамоксифен выводит воду из организма, что еще раз подчеркивает его необходимость именно во время приема стероидов, а не после.

Видео: Тамоксифен в бодибилдинге

Подведем итог

Много сегодня было сказано об этом препарате, но соберем все в кучу:

  1. Тамоксифен – средство, эффективное во время курса стероидов.
  2. Он не подходит для послекурсовой терапии.
  3. Тамокс, при правильном приеме, не имеет побочных эффектов.
  4. Его стоимость – низкая, что и делает его очень привлекательным.

Тамоксифен блокирует ароматизацию тестостерона, вследствие чего не повышается эстроген. Мужской организм не будет принимать женских свойств: опухание в ненужных местах, вялость, слабое либидо.

Тамоксифен – это дешево и сердито. Если у вас есть возможность купить более дорогие препараты, как например, анастрозол, то есть смысл поступить именно так.

Обязательно прочитайте об этом

Тамоксифен (Нольвадекс) в бодибилдинге | Danabol.com.ua

Тамоксифен (известен в спорте под названиями Тамоксимед, Нолвадекс и прочими) является лекарственным препаратом, относится к группе половых гормонов. С самого начала он разрабатывался для применения в медицинских целях, для профилактики рака груди у женщин. Но в последнее время активно применяется в бодибилдинге.

Тамоксифен соло в бодибилдинге получил большую популярность из-за того, что большинство анаболических и андрогенных препаратов увеличивают концентрацию женских половых гормонов эстрогенов в организме атлета, что в свою очередь приводит к феминизации, она выражается в следующих симптомах:

  • чрезмерная задержка жидкости в организме;
  • ожирение по женскому типу;
  • рост грудных желез.

Тамоксифен относится к нестероидным антиэстрогеновым веществам, иными словами он блокирует работу эстрогеновых рецепторов. Его действие позволяет нормализировать уровень мужского полового гормона тестостерона в крови, нормализировать количество эстрогена. Поэтому многие бодибилдеры и представители прочих спортивных дисциплин принимают тамоксифен для уменьшения жировых отложений во время диеты, стимуляции роста мускулатуры и для профилактики, устранения нежелательных побочных реакций от приема стероидных препаратов. Идущая в комплекте с препаратом тамоксифен инструкция по применению в бодибилдинге, описывает две схемы приема антиэстрогена: на курсе, во время пкт.

Почему нужно проводить послекурсовую терапию с тамоксифеном:

Многие спортсмены слышали о пкт, но не все четко знают, для чего она нужна, поэтому часто в интернете можно встретить запрос «пкт расшифровка бодибилдинг». Пкт расшифровывают как послекурсовая терапия. Она необходима для следующего:

  • восстановления выработки природного тестостерона организмом;
  • сохранения набранной мышечной массы;
  • предотвращения гинекомастии и прочих негативных эстрогеновых эффектов;
  • профилактики атрофии яичек – для этого в терапию подключается прием гонадотропина.

Послекурсовую терапию обязательно нужно проводить в независимости от того, насколько был тяжелый курс стероидов. Многих спортсменов интересует, как принимать после курса тамоксифен в бодибилдинге – оптимальной дозировкой будет 10-20 мг препарата ежедневно на протяжении 2-3-х недель, при этом в пкт необходимо подключить провирон.

Также принимать тамоксифен рекомендовано на послекурсовой терапии спустя 3-4 недели после прохождения курса анаболических стероидов. Обязательно нужно принять во внимание тот факт, что тамоксифен не может приниматься после курсов нандролонов и тренболонов, так как антиэстроген только усилит их побочные реакции.

Способ приема тамоксифена и с чем его комбинировать:

Антиэстроген можно принимать не только во время пкт, многие атлеты в профилактических целях во время курса стероидов принимают тамоксифен в бодибилдинге, дозировка при этом составляет 10 мг ежедневно. Суточная доза должна варьироваться от 10 до 30 мг. В редких случаях спортсмены могут увеличить дозировку до 40 мг в день.

Даже минимальная дозировка в большинстве случаях помогает избежать проявления гормонального дисбаланса и гинекомастии – увеличения грудных желез. Исходя из вышеуказанного, многие спортсмены легко разберутся, как принимать тамоксифен в бодибилдинге. Дозы в 40 мг являются максимальными. Превышение данной дозировки может привести к возникновению нежелательных побочных реакций. Прием препарата во время курса нужно начинать со второй недели употребления стероидных препаратов, поскольку количество эстрогенов в крови возрастает под конец первой недели курса.

Тамоксифен не способен полностью устранить ароматизацию стероидов, его необходимо принимать с ингибиторами ароматазы, лучше всего подойдет провирон. Подобный комплекс дает наилучшие результаты.

Возможные побочные эффекты от приема тамоксифена:

Перед тем, как узнать, как принимать в бодибилдинге тамоксифен, каждый спортсмен должен знать о возможных побочных эффектах от приема, они могут проявиться в виде:

  • приступов тошноты, головокружения;
  • повышения температуры тела;
  • уменьшении либидо, снижении потенции;
  • частичного облысения;
  • высыпаний на теле – акне;
  • частого ощущения усталости.

Как подтверждают многочисленные отзывы - тамоксифен в бодибилдинге является действенным препаратом не только для устранения гинекомастии, но также он позволяет просушить мышцы, сделать их более твердыми, увеличить силовые показатели. Цена в аптеках на тамоксифен довольно демократичная, что позволяет многим спортсменам пройти эффективную послекурсовую терапию и сделать профилактику против эстрогеновых побочных эффектов.

Тамоксифен (Нолвадекс) в бодибилдинге

     Тамоксифен (тамоксифен цитрат) – один из широко используемых медикаментов в бодибилдинге, но чаще всего он используется как средство защиты, а не как активный компонент. Большинство тех, кто знаком с допингом в бодибилдинге, ассоциирует его с анаболическими стероидами, однако тамоксифен не относится к этой категории. В основном известный под названием нолвадекс, или нолва, тамоксифен чаще всего используется в бодибилдинге теми, кто применяет анаболические стероиды, с двумя целями: во время курса для предотвращения побочных эффектов, и еще чаще - во время ПКТ (терапии после курса анаболических стероидов). В основном тамоксифен хорошо переносится, это относится и к мужчинам, и к женщинам, однако дамы в основном используют его в значительно меньших дозах и делают это ради его активного, а не защитного эффекта.

     Тамоксифен был впервые синтезирован в 1962 году в попытке создать противозачаточную таблетку, принимаемую на следующий день после полового акта. Его испытания показали, что он не дает желаемого эффекта, однако вскоре обнаружились другие ценные качества. Было понимание, что именно эстроген является проблемным гормоном у тех, кто страдает от рака груди. У тамоксифена обнаружилось свойство блокировать взаимодействие эстрогена с его рецепторами. При этом уровень эстрогена в организме не уменьшался, и это было очень ценно.

     В то время, как была доказана польза тамоксифена в борьбе с раком груди, были обнаружены и другие его полезные качества. Повышение эстрогена является в бодибилдинге проблемой для многих, кто использует анаболические стероиды. Это связано с эффектом их ароматизации. Тамоксифен позволяет решать проблемы у культуристов, связанные с ростом уровня эстрогена.

   Еще одним открытым важным преимуществом тамоксифена явился его эффект, стимулирующий производство собственного тестостерона, что делает его идеальным средством для использования на ПКТ.

     Многие, кто применяют нолвадекс на курсе, делают это с целью уберечься от гинекомастии. Стероиды, которые имеют высокоандрогенный характер, часто ведут к этой проблеме. Тамоскифен позволяет ее предотвратить. Большинству, кто принимает тамоксифен на курсе с этой целью, хватит 10мг в день. Однако некоторым этого будет мало, таким атлетам нужно будет также уменьшать уровень эстрогена с помощью ингибиторов ароматазы, таких, как аримидекс или летрозол. Для многих ингибиторы ароматазы - более надежный вариант, чем тамоксифен.

     ПКТ – это самый распространенный период применения тамоксифена в бодибилдинге. Доказано, что нолвадекс имеет значительный эффект в части стимуляции выработки собственного тестостерона в основном за счет увеличения уровня лютенизирующего гормона. Понятно, что когда применяются анаболические стероиды, выработка собственного тестостерона подавляется. Степень подавления зависит от вида использовавшихся стероидов и продолжительности их применения, но оно (подавление) в любом случае будет иметь место. Как только курс закончен, нужно быть готовым к действию, чтобы сохранить набранное мясо и здоровье. Большинство, кто следует правильному режиму ПКТ, делают это 3-4 недели, и для них тамоксифен – это то, что нужно. Для многих нет ничего лучше, чем ПКТ с использованием лишь ХГЧ и тамоксифена. Однако не стоит заблуждаться, считая, что за несколько недель такой терапии вы вернете 100% бывшего у вас производства собственного тестостерона, хотя это и значительно ускорит процесс возврата к былому уровню.

     Итого: при приеме во время курса анаболических стероидов эффект тамоксифена по предотвращению некоторых из побочных эффектов анаболиков очень приличный, но ингибиторы ароматазы в этом плане будут более эффективны. Однако, когда речь заходит о применении на ПКТ, тамоксифен – это точно один из лучших способов терапии, именно в этом периоде большинство бодибилдеров смогут извлечь из его использования максимум преимуществ.

     Вы только что прошли курс применения стероидов и ищете что-то, чтобы нормализовать уровень тестостерона? Не можете остановить свой выбор между старым добрым тамоксифеном (иначе – нолвадекс) и его двоюродными братьями - ралоксифеном и торемифеном? Греческие исследователи опубликовали результаты исследований фертильности и стерильности, которые говорят о том, что тамоксифен – это лучший выбор.

     Тамоксифен, ралоксифен и торемифен – это препараты класса SERM (селективные модуляторы рецепторов эстрогена): они прикрепляются к рецепторам эстрадиола (один из типов эстрогенов, который образуется из тестостерона), но не запускают процесс, который обычно начинается, когда эстрадиол прикрепляется к своим рецепторам. Вот почему врачи используют SERM для борьбы с опухолями, которые растут, стимулируемые воздействием женских гормонов.

     В бодибилдинге «химики» используют SERM, потому что они увеличивают уровень тестостерона. Один из способов, с помощью которого тело мониторит производство собственных половых гормонов – это контроль за концентрацией эстрадиола в крови. Если он становится слишком высоким, то тело тормозит производство половых гормонов, включая тестостерон. Поскольку в механизме контроля задействованы рецепторы эстрадиола, SERM подстегивают производство теста. Вот почему бодибилдеры-«химики» используют такие препараты, как тамоксифен, после курса.

   Греческие исследователи провели эксперимент с почти 300 бесплодными мужчинами, у которых было пониженное производство спермы, и большинство из которых имело пониженный уровень тестостерона. Ученые давали им либо 20мг тамоксифена, либо 60мг торемифена, либо 60мг ралоксифена ежедневно в течении трех месяцев.

     Таблица показывает, что произошло с уровнями тестостерона (Т), фоликкулостимулирующего гормона (FSH) и лютенизирующего гормона (LH). Даны диапазоны данных замеров в начальной точке исследования (BL) и по истечении 1, 2 и 3 месяцев приема препаратов.

   Ралоксифен оказал небольшой эффект на уровень тестостерона, так что это – неинтересный кандидат на роль препарата для ПКТ в бодибилдинге. Торемифен несколько лучше, но не так хорош, как тамоксифен.

   Чтобы вы увидели законченную картину, мы приводим вторую таблицу, на которой видно, какой эффект оказали тамоксифен, торемифен и ралоксифен на параметры спермы. И снова, ралоксифен показал себя хуже, чем тамоксифен и торемифен.

     Исследователи полагают, что тамоксифен и торемифен более эффективны за счет того, что работают не только через механизм гормональной саморегулировки тела, но и стимулируя гипофиз вырабатывать больше гормонов-мессенджеров, которые, в свою очередь, подталкивают производство тестостерона. Они также полагают, что тамоксифен и торемифен оказывают прямо воздействие на клетки, производящие тестостерон.

Первоисточник

Перевод: http://i-pump.ru/

Понравилось? Поделись с друзьями!

как принимать на курсе и ПКТ, побочные эффекты

Тамоксифен (сленговое название: «тамокс») – препарат, который блокирует рецепторы эстрогенов в организме, торговое название – Нолвадекс. Спортсмены используют данный препарат преимущественно во время проведения послекурсовой терапии после употребления анаболических стероидов для восстановления уровня собственного тестостерона. В медицине Нолвадекс применяется для лечения рака груди.

Тамоксифен на пкт

В спорте он является одним из самых популярных антиэстрогенов, так как доступен в большинстве аптек и недорого стоит. Необходимо отметить, что практика его использование длится уже не одно десятилетие. Обратите внимание, что Тамоксифен блокирует эстрогеновые рецепторы во всем организме (Кломид же оказывает действие только на рецепторы в гипофизе и яичках). В данной таблице приведена обобщенная схема применения Нолвадекса для проведения послекурсовой терапии.

Не забивайте, что тамокс нельзя применять на ПКТ после препаратов, которые обладают прогестагенной активностью (Нандролон, Тренболон), так как он только усилит данную активность.

Тамоксифен на курсе

Некоторые спортсмены рекомендуют употреблять тамокс на протяжении всего курса анаболических стероидов, начиная со второй недели курса в небольших, профилактических дозировках (10-20 мг в сутки). Такая схема применения предполагает изначальное предотвращение побочных эффектов, которые связаны с эстрогенами (гинекомастия, задержка жидкости). Однако не забивайте, что для этой цели рациональнее во время курса использовать ингибиторы ароматазы, в том числе и Провирон. Тамоксифен применяется, если у спортсмена не имеется возможности приобрести ингибиторы ароматазы.

Однако такая схема приема имеет и немало противников, которые утверждают, что прием Тамоксифена (а так же ингибиторов ароматазы) на курсе замедляет прогресс: рост массы и силовых показателей.

Причина такого замедления может быть связана с тем, что употребление на курсе Нолвадекса (а так же ингибиторов ароматазы) предотвращает задержку жидкости. Отсутствие эффекта задержки воды в организме воспринимается многими спортсменами как «замедление прогресса». Однако необходимо понимать, что мышечный рост происходит, просто он менее заметен, так как в отличии от задержки жидкости, мышцы нарастают постепенно в течении всего курса. Так же нужно отметить, что из-за того, что вода не задерживается, феномен отката после окончания курса будет выражен гораздо меньше.

Тамоксифен побочные эффекты

В связи с тем, что тамоксифен достаточно токсичный, он обладает относительно широким спектром побочных действий. Стоит отметить, что все препараты этого класса обладают схожими побочными эффектами, отличие заключается в частоте их проявления. Нолвадекс может вызывать такие побочные эффекты как тошнота и потеря аппетита. При длительном применении увеличивается вероятность развития болезней сердца и роста раковых клеток, вызывает нарушения зрения.

На сайте iron-set.com предоставлена информация исключительно ознакомительного характера. «IronSet» не продает и не призывает к употреблению сильнодействующих веществ, в том числе анаболических стероидов. Данная информация собрана из общедоступных источников и не может служить основанием для принятия решения об использовании тех или иных препаратов. Представленная на сайте информация не призывает к применению или распространению сильнодействующих веществ.

Welcome

Мои мысли Welcome
Мои мысли о море

Все больше и больше я думаю о море. Не хочу сказать, что никогда там не был, просто эта тишина и спокойствие не покидают меня ни на минуту.

Мои друзья часто отдыхают на море - не видя всей прелести и не слушая его. Для них это просто развлечение и отдых. Я вижу это иначе.

Умиротворение и мысли о величии океана. Здесь я могу отказаться от повседневной суеты и полностью погрузиться в свои мысли и отдых.

Вы, наверное, смотрели фильм «Достучаться до небес»? Именно об этом я и говорю. Сценарист похож на меня, и его вдохновение возникло из ниоткуда не зря.

Томас Ян и Тиль Швайгер - талантливые люди, они понимают и верят в то, что сделали при создании этого замечательного фильма.

Посмотрите, и вы измените свое отношение к морю, океану, и вы поймете мои мысли, которые я продолжу освещать здесь чуть позже.

Продолжение следует...

My thoughts on the sea

More and more I think about the sea. I do not want to say that I have never been there, just this silence and calmness does not leave me for a moment.

My friends often rest on the sea - not seeing all the charm and do not listen to it. For them, it's just fun and relaxation. I see it deeper.

Peace, tranquility and thoughts of the greatness of the ocean. Here I can renounce the bustle of everyday life and completely immerse myself in my thoughts and rest.

You've probably watched the movie Knocking on Heaven? This is exactly what I am talking about. The writer is like me and his inspiration came out of nowhere for a reason.

Thomas Jan and Til Schweiger are talented people, they understand and believe in what they did in making this wonderful film.

Try and you change your attitude to the sea, the ocean and you will understand my thoughts, which I will continue to highlight here a little later.

To be continued...

Альфа-рецептор эстрогена в головном мозге опосредует индуцированные тамоксифеном изменения физиологии у мышей

Редакции для этого документа:

1) Один рецензент высказал серьезное теоретическое беспокойство: имеют ли все эти подробные наблюдения какое-либо отношение к состоянию человека, абсолютно неизвестно. В связи с этим было бы важно уточнить, что авторы подразумевают под «терапией тамоксифеном»? Человека или мышей? Если речь идет о людях (что, по-видимому, является сценарием), это явно невозможно проверить на мышах.Где эта работа может быть актуальной, так это использование тамоксифена в трансгенных конструкциях моделей мышей. Однако вмешательство тамоксифена не имитировало этот подход. Таким образом, в конце концов, неясно, что этот обширный набор данных отражает в отношении состояния человека или других проблем. Похоже, что авторы явно стремятся устранить побочные эффекты тамоксифена в отношении состояния человека. Что означает утверждение о «побочных эффектах» в отношении мышей? Им следует изменить формулировку деталей, касающихся мышей, но они могут обсудить этот вопрос в Обсуждении как потенциально имеющий отношение к людям.

Это хорошо понято. Теперь при обсуждении терапии тамоксифеном слово «терапия» разрешается использовать только для людей. Чтобы прояснить это различие и надлежащим образом ограничить интерпретацию наших данных, мы изменили название на «Рецептор эстрогена альфа в мозге опосредует индуцированные тамоксифеном изменения физиологии у мышей» и удалили слово «терапия» из нашего плана эксперимента, сообщая результатов и большинство обсуждений. Мы обсуждаем терапию тамоксифеном у людей при постановке проблемы во Введении и снова в конце Обсуждения, чтобы подчеркнуть потенциальное значение для людей, как это предлагается.

2) Данные по экспрессии генов впечатляют и могут идентифицировать специфические гены, модулируемые тамоксифеном ERα-зависимым образом. Однако было бы очень полезно более подробное описание ключевых генов в нейронах, которые дифференциально экспрессируются в КО дикого типа и Erα в ответ на тамоксифен. Эта информация не была ясна из дополнительных файлов, и графики вулканов, хотя и предоставляют довольно похожие на Роршаха картины дифференциальной экспрессии генов, не содержат конкретных сведений об идентичности генов, которые дифференциально регулируются тамоксифеном у КОК дикого типа и Erα. .С точки зрения разработки лекарств, что авторы подчеркнули во введении, на какие ГЭГ стоит нацеливаться, чтобы смягчить побочные эффекты тамоксифена? Без информации о конкретных DEG трудно понять, как данные Drop-seq предоставляют важные сведения, которые могут привести к новым адъювантным методам лечения для предотвращения побочных эффектов тамоксифена.

Мы благодарим рецензента за эти важные поясняющие комментарии о данных Drop-seq. Наша первоначальная заявка была сосредоточена на общих эффектах тамоксифена на экспрессию генов в различных исследованных типах клеток. Как указано в тексте, это указывает на то, что нейроны и эпендимные клетки наиболее транскрипционно чувствительны к введению тамоксифена. Мы продолжили выделять пути (передача нейропептидных сигналов, окислительное фосфорилирование, гликолиз), которые важны для функции нейронов и координированно подавляются тамоксифеном в нейронах дикого типа, но не в нейронах cKO. Тем не менее, мы можем видеть, как отсутствие индивидуальных названий генов может показаться запутанным или неудовлетворительным.

Для анализа путей мы теперь выделяем гены на рисунке 4C, идентифицируя отдельные гены внутри важных путей, которые могут быть потенциальными кандидатами для последующих исследований.Кроме того, мы пришли к выводу, что если отдельные дифференциально экспрессируемые гены являются потенциальными регуляторами физиологических эффектов тамоксифена, то они, вероятно, будут дискордантно регулироваться в генах дикого типа по сравнению с ПОА гипоталамуса cKO. Теперь мы предоставляем полный список генов, которые значительно (при р <0,05) по-разному экспрессируются в клетках дикого типа, обработанных тамоксифеном по сравнению с носителем (дополнительный файл 1I и J). Дополнительные файлы также предоставляют соответствующие данные о дифференциальной экспрессии тех же генов в клетках cKO.Хотя эта информация доступна в дополнительных файлах, мы выделили некоторые из этих генов на рисунке 5D, который одновременно показывает, как отдельные гены регулируются тамоксифеном в клетках дикого типа и клетках cKO.

3) Чтобы лучше понять влияние ERα KO на экспрессию генов, было бы полезно упомянуть где-нибудь в статье об относительной численности и распределении гипоталамического ERα в изученных типах клеток (особенно нейронах и различных типах глии).Включают ли гипоталамические ERβ, GPER или даже PRs в терморегуляцию, плотность костной ткани или активность, и если да, ожидали бы авторы аналогичного взаимодействия с тамоксифеном, если бы эти рецепторы были отключены?

Мы согласны с тем, что важно понимать, вносят ли PR или другие ER изменения в изменения, вызванные тамоксифеном. Относительное количество и распределение гипоталамического ERα в различных типах клеток выделено на рисунке 3B, который показывает процент клеток внутри каждого типа клеток, в которых мы обнаружили Esr1, Esr2, Pgr и Gper1. Распределение Esr1, Esr2, Pgr и Gper1 теперь также предоставляется для подтипов нейронов на рисунке 4B (теперь они включены как первые четыре гена на оси x).

Хотя мы исследовали только влияние условного KO ERα на температуру тела, плотность костей и физическую активность, возможно, что ERα, экспрессируемый вне клона Nkx2-1, или другие рецепторы помимо ERα также могут быть задействованы. В исправленной рукописи эта возможность признается в нескольких разделах рукописи, как указано ниже:

a) Мы исследуем выражения Esr1, Esr2, Pgr и Gper1 в наших данных (Рисунок 3B, Рисунок 4B).

b) Мы цитируем исследования, которые показывают влияние других рецепторов на терморегуляцию, в Обсуждение: Opas et al., 2009, Roepke et al., 2010), физическая активность: Ogawa et al., 2003), и кости: Windahl et al. ., 2002, Lindberg et al., 2002, Roepke et al., 2010).

c) Эта более всесторонняя оценка наших данных и литературы приводит к выводу, что «передача сигналов ERα в линии Nkx2-1 как главный медиатор» (не обязательно единственный медиатор) «эффектов тамоксифена на терморегуляцию, физическую активность. , и гомеостаз костей ».

4) Хотя данные подтверждают, что тамоксифен снижает внутреннюю температуру тела и увеличивает температуру хвоста в течение многих часов во время светового цикла, приливы у женщин характеризуются внезапным повышением температуры, которое исчезает в течение нескольких минут. Таким образом, авторы должны быть осторожны, приравнивая эти долгосрочные изменения к более отчетливым во времени приливам жара, и признать это предостережение в Обсуждении.

Спасибо за указание на это важное различие.Наряду с различием между терапией тамоксифеном у людей и лечением тамоксифеном у мышей, любые эффекты приливов сильно отличаются от эффектов на терморегуляцию. (Мы думаем, что вазомоторные симптомы у женщин являются следствием изменений терморегуляции, которые сопровождают менопаузу, но это не является предметом настоящей рукописи.) Мы признали это предостережение в Обсуждении и провели параллели между нашими выводами и эффектами овариэктомии у женщин. грызунов, что также приводит к более высокой температуре хвоста, а иногда и к более низкой температуре ядра.

«Однако важно признать, что устойчивое повышение температуры кожи хвоста, наблюдаемое здесь и в других моделях животных (Kobayashi et al., 2000, Padilla et al., 2018), не полностью отражает эпизодический характер приливов у мужчин. люди ».

5) «Анализ экспрессии отдельных клеток не смог обнаружить значительного снижения экспрессии Esr1 в любом типе клеток мышей Esr1 cKO , но четко продемонстрировал, что фактор транскрипции гомеобокса NK2 Nkx2-1 был обогащен нейронами и эпендимными клетками. «- если я правильно это понимаю, это означает, что нет никаких доказательств того, что Esr1 действительно был удален в нейронах и эпендимных клетках.Это кажется проблематичным, могут ли авторы предоставить больше объяснений и некоторые гарантии того, что модель действительно такая, как они говорят?

Как проницательно заметил рецензент, мы, к сожалению, не обнаружили значительного снижения транскрипта Esr1 ни в каких типах клеток. Отмеченным ограничением scRNA-seq является потеря статистической мощности, поскольку клетки делятся на отдельные кластеры и анализируются. Эта потеря мощности особенно влияет на анализ транскриптов с низкой экспрессией, таких как Esr1.Поэтому мы исследовали экспрессию белка ERα с помощью иммуногистохимии у мышей дикого типа и мышей cKO, которая представлена ​​на рисунке 5A. Действительно, иммунореактивность ERα отсутствует в VMH, ARC и POA условной модели KO, как показано на рисунке 5A и в предыдущих публикациях нашей группы (Correa et al., 2015, Herber et al., 2019). Тем не менее, мы согласны с тем, что показ данных по экспрессии гена для Esr1 важен, несмотря на то, что мы не наблюдали значительного снижения. Теперь мы добавили этот анализ, как на фиг. 5 - рисунок в приложении 1A, где показаны кратные изменения экспрессии Esr1 в cKO по сравнению с мышами дикого типа, по существу, без изменений.

6) «29 807 клеток (8 220 от n = 3 мышей, получавших носитель, 21 587 от n = 5 мышей, получавших тамоксифен)» - могут ли авторы решить вопрос о том, является ли проблематичным, что у них почти в 3 раза больше клеток от мышей, получавших тамоксифен, по сравнению с контрольной .

Это очень важный момент, и мы благодарим рецензента за его выделение. Дисбаланс в количестве клеток был следствием смерти одной контрольной мыши непосредственно перед завершением графика лечения. С дополнительным пространством в нашем конвейере drop-seq мы включили дополнительную обработанную тамоксифеном мышь, которую лечили одновременно и которая была доступна в то время.Как и рецензент, мы с трепетом относились к анализу неравного количества мышей-носителей и контрольных мышей, однако авторы пакета scRNA-seq, который мы использовали (Seurat), утверждают, что несбалансированное количество клеток по своей сути не является проблемой (https: // github .com / satijalab / seurat / issues / 1325).

Тем не менее, чтобы решить эту проблему, которую мы разделяем с рецензентом, мы произвольно отобрали наши группы после начальной качественной фильтрации, так что каждая группа будет содержать 8 220 ячеек. Как показано на изображениях ответов автора 1 и 2, результаты анализа с пониженной выборкой отражают результаты, полученные в первоначальном представлении, в отношении: идентифицированных типов клеток, распределения ER, уникальной чувствительности нейронов и эпендимных клеток к тамоксифену, влияние тамоксифена на функциональные пути и противоречивые эффекты тамоксифена на клетки дикого типа и клетки cKO. Вместе эти данные указывают на то, что дисбаланс в количестве ячеек не повлиял на результат анализа, и поэтому мы считаем целесообразным оставить в рукописи первоначально представленный анализ, обладающий большей статистической силой.

Повторный анализ scRNA-Seq с пониженной дискретизацией: все экспериментальные группы нормализовались точно до 8220 клеток после начальной качественной фильтрации.

7) Было непонятно, как рисунок 5 - рисунок в приложении 3 поддерживает утверждение: «Вместе эти данные показывают, что гипоталамическая экспрессия ERα необходима для значительной части изменений экспрессии генов, обычно индуцируемых тамоксифеном, включая многие функциональные пути и те, которые контролируют активность нейронов и мишени эстрогена во многих типах клеток и подтипах нейронов. ". Графики, кажется, указывают на небольшое перекрытие между диким типом и Esr1KO.

Мы благодарим рецензента за то, что он указал на сбивающий с толку способ описания наших данных. Как правильно указывает рецензент, существует небольшое совпадение между клетками дикого типа и Esr1cKO в ответ на тамоксифен, и это то, что мы намеревались донести. Раздел результатов, поясняющий рисунок 5 и дополнения к нему, был переписан для ясности. Кроме того, маркировка на Рисунке 5 и дополнениях к нему была переработана, чтобы передать точку зрения рецензента.

Название:

В свете комментариев рецензента авторы могут рассмотреть возможность удаления «побочных эффектов» из заголовка.

Мы изменили название на «Рецептор эстрогена альфа в головном мозге опосредует изменения физиологии мышей, вызванные тамоксифеном».

https://doi.org/10.7554/eLife.63333.sa2

Выживаемость тамоксифена при раке груди у мужчин: проспективный когортный анализ

  • 1.

    Losurdo, A., Rota, S., Gullo, G., Masci, G., Torrisi, R., Bottai, G. et al. Споры в клинико-патологических характеристиках и стратегиях лечения рака груди у мужчин: обзор литературы. Крит. Преподобный Онкол. Гематол. 113 , 283–291 (2017).

    Артикул Google Scholar

  • 2.

    Леон-Ферре, Р. А., Гиридхар, К. В., Хикен, Т. Дж., Муттер, Р. У., Коуч, Ф. Дж., Хименес, Р. Е. и др. Современный обзор рака груди у мужчин: текущие данные и вопросы без ответов.Метастазы рака 37 , 599–614 (2018).

    Артикул Google Scholar

  • 3.

    Эггеманн, Х., Игнатов, А., Смит, Б. Дж., Альтман, У., фон Минквиц, Г., Рол, Ф. В. и др. Адъювантная терапия тамоксифеном по сравнению с ингибиторами ароматазы у 257 пациентов с раком груди у мужчин. Рак молочной железы Res. Удовольствие. 137 , 465–470 (2013).

    CAS Статья Google Scholar

  • 4.

    Стренг, М., Игнатов, А., Райниш, М., Коста, С. Д. и Эггеманн, Х. Сравнение размеров опухоли при пальпации, УЗИ и маммографии при раке груди у мужчин: первые результаты проспективного регистрационного исследования. J. Cancer Res. Clin. Онкол. 144 , 381–387 (2018).

    Артикул Google Scholar

  • 5.

    Эггеманн, Х., Альтманн, У., Коста, С. Д. и Игнатов, А. Выживаемость тамоксифена и ингибитора ароматазы при раке груди у мужчин и женщин.J. Cancer Res. Clin. Онкол. 144 , 337–341 (2017).

    Артикул Google Scholar

  • 6.

    Эггеманн, Х., Бернрайтер, А. Л., Рейниш, М., Лойбл, С., Таран, Ф. А., Коста, С. Д. и др. Лечение тамоксифеном рака груди у мужчин и риск тромбоэмболии: проспективный когортный анализ. Br. J. Cancer 120 , 301–305 (2019).

    CAS Статья Google Scholar

  • 7.

    von Elm, E. , Altman, D.G., Egger, M., Pocock, S.J., Gotzsche, P.C., Vandenbroucke, J.P. et al. Заявление об усилении отчетности по обсервационным исследованиям в эпидемиологии (STROBE): руководство по отчетности по обсервационным исследованиям. Ланцет 370 , 1453–1457 (2007).

    Артикул Google Scholar

  • 8.

    Госс, П. Е., Рид, К., Пинтили, М., Лим, Р. и Миллер, Н. Карцинома мужской груди: обзор 229 пациентов, поступивших в больницу принцессы Маргарет в течение 40 лет: 1955 -1996.Рак 85 , 629–639 (1999).

    CAS Статья Google Scholar

  • 9.

    Рибейро, Г. и Суинделл, Р. Адъювант тамоксифена для лечения рака груди у мужчин (МБК). Br. J. Cancer 65 , 252–254 (1992).

    CAS Статья Google Scholar

  • 10.

    Вольм, М. Д. Рак груди у мужчин. Curr. Удовольствие. Комплектация Онкол. 4 , 159–164 (2003).

    Артикул Google Scholar

  • 11.

    Roselli, C. E. и Resko, J. A. Половые различия в регулируемой андрогенами экспрессии ароматазы цитохрома P450 в головном мозге крысы. J. Steroid Biochem. Мол. Биол. 61 , 365–374 (1997).

    CAS Статья Google Scholar

  • 12.

    Шетти, Г., Кришнамурти, Х., Кришнамурти, Х. Н., Бхатнагар, А. С. и Мудгал, Н. Р. Влияние длительного лечения ингибитором ароматазы на функцию яичек взрослых самцов шляпных обезьян (М.радиата). Стероиды 63 , 414–420 (1998).

    CAS Статья Google Scholar

  • 13.

    Андерсон, В. Ф., Алтуис, М. Д., Бринтон, Л. А. и Девеса, С. С. Рак груди у мужчин похож или отличается от рака груди у женщин? Рак молочной железы Res. Удовольствие. 83 , 77–86 (2004).

    Артикул Google Scholar

  • 14.

    Энрикес Абреу, М., Энрикес Абреу, П., Афонсу, Н., Перейра, Д., Энрике, Р. и Лопес, С. Модели рецидивов и лечения рака груди у мужчин: ключ к прогнозу? Int. J. Cancer 139 , 1715–1720 (2016).

    CAS Статья Google Scholar

  • 15.

    Игнатов А., Эггеманн Х., Бургер Э. и Игнатов Т. Особенности рецидивов рака груди в зависимости от биологического подтипа. J. Cancer Res. Clin. Онкол. 144 , 1347–1355 (2018).

    Артикул Google Scholar

  • 16.

    Оттини, Л., Капальбо, К., Риццоло, П., Сильвестри, В., Бронте, Г., Риццо, С. и др. HER2-положительный рак груди у мужчин: обновленная информация. Рак молочной железы 2 , 45–58 (2010).

    CAS PubMed Google Scholar

  • Последовательный анализ одноклеточной РНК выявил длительные неблагоприятные эффекты тамоксифена на нейрогенез в пренатальном и взрослом мозге

    Индуцируемая тамоксифеном (ТАМ) система CreER / LoxP является одним из наиболее широко используемых генетических инструментов, которые позволили точные генные манипуляции в различных клеточных субпопуляциях в любой конкретный момент времени.Помимо нокаута гена, технология CreER / LoxP также позволила маркировать любые типы клеток для исследования генетического картирования судеб (1-4). ТАМ, селективный модулятор рецепторов эстрогена, считается новаторским и широко используемым лекарством для лечения рака груди, положительного по рецепторам эстрогена (5). Исследование на людях, основанное на базе данных безопасности AstraZeneca, показало, что ТАМ-терапия рака груди во время беременности тесно связана со спонтанными абортами, дефектами плода и врожденными пороками развития (6). Во избежание серьезных врожденных дефектов прием ТАМ необходимо прекратить во время беременности у пациентов с раком груди (7–9).У грызунов о побочных эффектах ТАМ на пренатальных и постнатальных мышах сообщалось в большом количестве исследований. Эмпирически введение ТАМ или его активного метаболита, 4-гидрокситамоксифена (4-ОН-ТАМ) через желудочный зонд (от ~ 1,5 до 10 мг ТАМ / мышь) или внутрибрюшинными (IP) инъекциями (от ~ 750 мкг до 1,5 мг ТАМ / мышь ) беременным мышам привело к гибели эмбрионов и / или дистоции. Для получения постнатального потомства часто требуется кесарево сечение с последующим приемом на потомство (10–15).

    Наше первоначальное исследование показало, что введение ТАМ беременным мышам на 10-й эмбриональный день (E10) уменьшило размер полушарий головного мозга и обонятельных луковиц, увеличило боковой желудочек и истончило кортикальную пластинку (рис. 1A), что свидетельствует о пренатальном периоде. Воздействие ТАМ оказывает сильное влияние на нейрогенез коры головного мозга. Мы вводили ТАМ более чем 70 пометам трех разных линий мышей путем внутрибрюшинной инъекции (т.е. C57BL / 6, 129S6 / C57BL / 6 и CD1). Дозы ТАМ, проверенные на беременную самку, составляли 500 мкг (5 пометов), 750 мкг (≥50 пометов), 1 мг (5 пометов) и 2 мг (≥10 пометов).Задержка родов и / или гибель плода всегда наблюдались в пометах с дозой 750 мкг / животное и выше.

    Чтобы изучить влияние ТАМ на корковый нейрогенез, мы провели анализ секвенирования одноклеточной РНК (scRNA-seq). В сочетании с количественной гибридизацией in situ (ISH) и анализами иммуноокрашивания мы обнаружили, что введение однократной дозы пренатального ТАМ способствовало преждевременной дифференцировке нейронов, в то время как оно блокировало пролиферацию нервных клеток-предшественников (NPC), что в конечном итоге привело к нарушению коркового нейрогенеза в пренатальном и перинатальном мозге.Мы также обнаружили, что TAM может оказывать эти неблагоприятные эффекты посредством дисрегуляции передачи сигналов Wnt-Dmrta2, которая, как было показано, играет критическую роль в поддержании судьбы NPC и дифференцировке нейронов (16, 17). Более того, мы показали, что введение ТАМ на ст. E8.5 серьезно нарушает нейрогенез, дендритный морфогенез, синаптическую плотность и глиогенез у постнатального потомства. У взрослых мышей лечение ТАМ резко ослабляло пролиферацию нервных стволовых клеток в субвентрикулярной зоне (SVZ) и зубчатой ​​извилине (DG), двух областях, где происходит нейрогенез у взрослых.

    Результаты

    Пренатальное введение ТАМ Нарушение нейрогенеза и корковой организации у перинатального потомства.

    Было показано, что наивысшая переносимая доза для однократной внутриутробной (E7.5 - E10.5) внутриутробной инъекции ТАМ без значительной летальности в срок составляет около 1 мг на беременную самку (от 30 до 60 мкг ТАМ на грамм массы тела ) (15, 18). Наше предварительное исследование показало, что введение 500 мкг ТАМ мышам-репортерам Prominin1 CreER (Prom1-CreER / floxed ZsGreen) на E8.5 и E10 не вызывало детектируемого сигнала зеленого флуоресцентного белка на E18.Поэтому, чтобы изучить влияние ТАМ на кортикогенез, мы вводили 750 мкг ТАМ на беременную самку (от ~ 25 до 30 мкг ТАМ на грамм веса тела).

    Чтобы изучить эффекты ТАМ на корковый нейрогенез, мы вводили ТАМ беременным самкам на ст. E10, времени, когда корковый нейрогенез начинается в переднем мозге (19). Мы обнаружили, что ТАМ нарушает регуляцию экспрессии нескольких генов формирования коркового паттерна в моторной коре (Cyp26b1 и Epha7), соматосенсорной коре (Mdga1) и зрительной коре (Crym и Epha7) у потомков E18 (рис.1Б). Обработка ТАМ несколько снижала экспрессию гена маркера зрительной коры и увеличивала экспрессию соматосенсорного гена Mdga1 в задней части, что подразумевает дефицит формирования коркового паттерна у потомства, получавшего ТАМ.

    Для секвенирования одноклеточной РНК, ТАМ вводили беременной матери на E10. Чтобы свести к минимуму потенциальную вариабельность между людьми, мы объединили левое и правое полушария, изолированные из разных пометов для каждого экспериментального условия. На E12, когда полярность нейронов не установлена ​​полностью, этапы рассечения ткани и диссоциации клеток мало влияют на целостность клеток (жизнеспособность клеток> 95%).Объединенные образцы подвергали капельному анализу scRNA-seq (10 × Genomics) (рис. 1C). Затем мы подгруппировали наборы данных (4 193 ячейки / набор условий. Seed = 3) и применили фильтр качества и интегрированный анализ для объединения контрольных (CTL) и наборов данных TAM с общим количеством 8 386 клеток и 17 071 геном, используя пакет Seurat (20, 21). . На основе анализа аппроксимации и проекции однородного многообразия (UMAP) мы разделили клетки на 14 кластеров (рис. 1C). По обогащению экспрессии генов мы аннотировали 14 кластеров.Существуют нейронные клетки-предшественники (NPC1, Pax6 и NPC2, Olig2), тормозящие нейроны (Inh2, Dlx1 и Inh3, Gad2), корковые нейробласты (NB, Neurog2), возбуждающие нейроны коры (Ex, Neurod6), клетки Кахаля-Ретциуса (CR , Reln), кортикальные нейроны Cck + (Cck + , Cck), нейроны кортикального слоя (CH, Rspo1), клетки нервного гребня (NC, Crabp1), эритроциты (RBC, Alas2), эндотелиальные клетки (EC , Flt1), микроглии (MG, Ctss) и перицитов (PC, Vtn) (рис. 1D).

    Чтобы оценить общий эффект ТАМ на спецификацию клеточной судьбы, мы рассчитали отношения клеток в каждом кластере к общему количеству проанализированных клеток.Мы обнаружили, что пренатальное воздействие ТАМ значительно снижает соотношение кортикальных и подкорковых NPC (NPC1 и NPC2, синий и синий цвета смальты) на 17,62%, в то время как оно вызывает в общей сложности увеличение на 16,7% корковых (Ex, розовый цвет) и подкорковых ( Inh2 и Inh3, темно-зеленый и зеленый цвета) нейроны, клетки CR (темно-желтый цвет) и нейроны Cck + (оранжевый цвет) (рис. 1E). Пренатальное лечение ТАМ также уменьшало соотношение клеток в одном из основных центров формирования паттерна мозга - кортикальном рубце (светло-голубой цвет) (22).Чтобы сэкономить вычислительные ресурсы, мы случайным образом подгруппировали набор данных CTL и TAM до 4 193 ячеек на условие (23). Мы протестировали состав подтипа ячеек, используя два других случайных параметра подмножества (set.seed = 5 и 25). Мы обнаружили, что составы типов ячеек аналогичны для трех случайных подмножеств и полных наборов данных ячеек (Приложение SI, рис. S1A). Мы не наблюдали потери кластера клеток из-за случайного подмножества в текущем исследовании. Затем мы проанализировали экспрессию маркеров судьбы клеток в кластерах нейрональных клонов.В мозге, обработанном ТАМ, количество пролиферирующих клеток (Mki67 + ) и NPC кортикальной желудочковой зоны (VZ) (Pax6 + , кластер NPC1) заметно снижалось, в то время как количество клеток, экспрессирующих Eomes, увеличивалось. Увеличенные клетки Eomes + в основном располагались в кластере кортикальных нейронов новорожденного (Ex), подразумевая, что лечение ТАМ способствовало преждевременной экспрессии генов нейронов у предшественников Eomes + SVZ. В соответствии с вышеизложенными данными, количество клеток, экспрессирующих нейрональные гены, такие как Reln, Tbr1, Rbfox3 и Mef2c, было увеличено в кластерах кортикальных нейронов (Ex, Cck + и CR) мозга, обработанного ТАМ.Более того, повышенное количество предшественников интернейронов парвальбумина (Mef2c + ) в кластере Inh3 дополнительно указывает на преждевременный нейрогенез в мозге, обработанном ТАМ (24). Важно отметить, что в кластерах Inh3 и Ex было больше клеток, экспрессирующих маркер фазы G1 клеточного цикла, Cdkn1c, в мозге, обработанном TAM (Fig. 1F). Ингибитор циклин-зависимой киназы 1C (Cdkn1c) является сильным ингибитором нескольких комплексов G1 циклин / Cdk (циклин-зависимые киназы) и негативным регулятором пролиферации клеток (25, 26). Повышенное количество клеток в фазе G1 предполагает раннюю отмену клеточного цикла и последующую расширенную корковую нейрональную дифференцировку.Взятые вместе, наш первоначальный анализ scRNA-seq показал двухфазные эффекты ТАМ на корковый нейрогенез. С одной стороны, ТАМ подавлял развитие клеточного цикла и ингибировал пролиферацию NPC; с другой стороны, это увеличивало количество предшественников SVZ, экспрессирующих нейрональные гены, и, таким образом, приводило к преждевременной дифференцировке нейронов.

    Пренатальное воздействие ТАМ ингибировало пролиферацию предшественников VZ.

    Чтобы проверить первоначальный анализ scRNA-seq, мы сначала измерили экспрессию NPC в коре, используя маркеры VZ и SVZ, Pax6 и Eomes, соответственно.ТАМ был введен IP на E10. Образцы мозга были собраны на E12. Анализ иммуноокрашивания показал, что в мозге, обработанном ТАМ, количество NPC Pax6 + было значительно снижено (CTL = 87 ± 4%, TAM = 76 ± 5%; среднее ± стандартное отклонение), в то время как клетки Eomes + в SVZ были немного увеличены (CTL = 8 ± 3%, TAM = 12 ± 3%; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 2A). Количественный анализ ISH показал, что среднее количество точек мРНК Pax6 уменьшилось с 7 ± 2 на клетку в CTL до 5 ± 1 на клетку в коры головного мозга, обработанной ТАМ. Среднее количество Eomes puncta увеличилось с 3 ± 0.От 8 / ячейка до 5 ± 1,6 / ячейка (среднее ± стандартное отклонение) в головном мозге ТАМ (рис. 2В). Во-вторых, анализ включения BrdU в сочетании с иммуноокрашиванием Mki67 показал, что воздействие ТАМ на E10 значительно снижает количество клеток в клеточном цикле и в S-фазе (BrdU: CTL = 36 ± 8%, TAM = 26 ± 6% и Mki67: CTL. = 35 ± 6%, ТАМ = 24 ± 6%; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 2С). Мы наблюдали аналогичные результаты, когда ТАМ вводили на пике коркового нейрогенеза (приложение SI, рис. S1B). В-третьих, мы измерили длину S-фазы клеточного цикла, используя парадигму двойного мечения 5-этинил-2'-дезоксиуридин (EdU) / BrdU (25) (рис.2D). Клетки, которые вышли из S-фазы в течение периода мечения (2 ч), были помечены только EdU (зеленый цвет). Клетки в S-фазе были помечены BrdU (красный цвет). Анализ двойного мечения EdU / BrdU показал длительную S-фазу в пролиферирующих NPC, обработанных ТАМ (CTL = 4 ± 1 час, ТАМ = 7 ± 2 часа; среднее значение ± стандартное отклонение) (фиг. 2D). В-четвертых, мы оценили количество делящихся клеток (фаза М) в коре головного мозга с помощью антитела к фосфогистону h4 (ph4) (26). Мы обнаружили, что в мозге, обработанном ТАМ, было больше базальных клеток ph4 + , чем в контроле (CTL = 0.4 ± 0,3%, ТАМ = 1 ± 0,5%; среднее ± стандартное отклонение), что может вызвать временное увеличение клеток Eomes + . В отличие от своего действия на базальные делящиеся клетки, ТАМ уменьшал количество апикальных делящихся клеток ph4 + (CTL = 6 ± 1,4%, ТАМ = 4 ± 0,8%; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 2E), что может вызывать сокращение Pax6 + NPC и приводит к нарушению нейрогенеза. Наконец, мы обнаружили, что лечение ТАМ на ранней (E10) и средней стадии (E13) коркового развития быстро увеличивало уровень экспрессии молекулы остановки клеточного цикла, Cdkn1c (CTL = 0.2 ± 0,04 точек / ячейка, ТАМ = 0,4 ± 0,07 точек / ячейка; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 2F и приложение SI, рис. S1C). Взятые вместе, оказалось, что введение ТАМ нарушает развитие клеточного цикла, что, в свою очередь, ингибирует пролиферацию NPC. Одновременно ТАМ способствует временной пролиферации предшественников SVZ с последующим прекращением клеточного цикла, что приводит к преждевременному нейрогенезу. Хотя мы не можем исключить возможность того, что снижение сигнала BrdU в TAM-обработанных NPC было связано с репарацией ДНК, результат анализа включения BrdU согласовывался с количественными анализами Mki67, ph4, Pax6 и Eomes.

    Рис. 2.

    Пренатальное введение ТАМ ингибировало пролиферацию нейральных предшественников. (A) Иммуноокрашивание Pax6 и Eomes показывает, что обработка ТАМ на E10 значительно ингибировала пролиферацию предшественников VZ на E12, в то время как это увеличивало количество клеток в SVZ (клетки Pax6 + , P <0,0001; Eomes + клетки, P = 0,0002). ; U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 24, TAM n = 27). (Масштабная полоса, 30 мкм.) Красный прямоугольник на нижнем левом графике показывает область, используемую для количественного анализа.В правом нижнем углу показан процент клеток Pax6 + или Eomes + от общего числа ячеек. CTX, кора; HIP, гиппокамп; LGE, возвышение латерального ганглия; MGE, возвышение медиального ганглия. Ящичковая диаграмма показывает минимум, максимум, медиану, среднее значение (символ +), а также первый и третий квартили. (B) ISH показывает, что введение ТАМ на раннем этапе развития мозга (E10) снижает экспрессию и количество предшественников VZ (Pax6 + ), в то время как оно увеличивает экспрессию Eomes и количество предшественников SVZ (Eomes + ). (Pax6 точек / ячейка, P = 0.0026; Eomes puncta / ячейка, P = 0,0002; U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 14, TAM n = 19). (Масштабная шкала, 10 мкм.) (C) ТАМ резко снизил количество клеток в фазе S (BrdU + ) и общее количество клеток в клеточном цикле (Mki67 + ) (BrdU, P = 0,0264; Mki67, P = 0,0007; U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 19, TAM n = 18). ТАМ вводили на E10. BrdU был введен беременной самке на E12. Образцы собирали через 30 мин после введения BrdU. (Масштабная шкала, 30 мкм.) (D) Кинетический анализ прогрессии S-фазы клеточного цикла (P <0.0001, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 20, TAM n = 21). ТАМ вводился на E11. EdU вводили на E12. BrdU вводили через 2 ч после введения EdU. Мозг собирали через 30 мин после инъекции EdU. Увеличенные изображения справа показывают количественное определение BrdU (красный цвет) и EdU (зеленый цвет) одиночных или двойных положительных клеток. Двойные положительные клетки Edu / BrdU были помечены желтыми овалами. (Масштабная шкала, 20 мкм.) Прерывистые линии обозначают кору. (E) Введение ТАМ увеличивало количество базальных делящихся клеток (фосфо-гистон h4 + ), в то время как оно уменьшало количество апикальных делящихся клеток (апикальные, P <0.0001; базальный, P <0,0001; U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 32, TAM n = 38). (Масштабная шкала, 20 мкм.) (F) Cdkn1c ISH показывает пренатальное введение ТАМ в клетки, задержанные на E10, в фазе G1 (P <0,0001, U-критерий Манна-Уитни, CTL n = 12, TAM n = 12). (Шкала, 30 мкм.) *, 0,01 ≤ P <0,05; ** P <0,01.

    Чтобы исключить возможность того, что уменьшение количества NPC было вызвано ТАМ-индуцированным апоптозом, мы провели анализ мечения ник-конца dUTP терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (TUNEL).Мы не обнаружили повышенного апоптоза в мозге E12, когда ТАМ (2 мг / животное) вводили беременным мышам на E10 (Приложение SI, рис. S1D).

    ТАМ способствовал преждевременной и преходящей нейрональной дифференцировке в пренатальном мозге.

    Анализ scRNA-seq показал повышенное количество клеток, экспрессирующих постмитотические нейрональные маркеры, такие как Reln, Rbfox3, Tbr1 и Mef2c на E12, когда TAM вводили на E10. Было увеличено количество клеток, экспрессирующих ген фазы G1 клеточного цикла Cdkn1c в обработанном ТАМ головном мозге, что дополнительно указывает на преждевременную нейральную дифференцировку.В соответствии с приведенным выше анализом, иммуноокрашивание показало, что воздействие ТАМ на E10 в значительной степени способствовало продукции не только раннорожденных, Reln + клеток Кахаля-Ретциуса и Tbr1 + нейронов глубокого слоя (Reln: CTL = 1,7 ± 0,5%, TAM = 2,5 ± 0,6% и Tbr1: CTL = 9 ± 1,7%, TAM = 13 ± 1,6%; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 3 A и B), но также Mef2c + клетки поверхностного слоя на E12 (CTL = 0,5 ± 0,3%, TAM = 1,9 ± 0,5%; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 3C) (19). Увеличение количества клеток, экспрессирующих Mef2c, в коре, вероятно, происходило из кластера Cck + (рис.1F). Вышеуказанные результаты иммуноокрашивания были дополнительно подтверждены анализом ISH с использованием пан-нейронального маркера Rbfox3 (CTL = 0,16 ± 0,04 точки / клетка, TAM = 0,20 ± 0,05 точек / клетка; среднее значение ± стандартное отклонение) (фиг. 3D). Более того, мы также показали, что лечение ТАМ на пике коркового нейрогенеза (E13) резко увеличивало количество клеток Tbr1 + и Mef2c + в кортикальной пластинке на E14, при этом оказывая небольшое влияние на общее количество клеток Reln + . в корковой маргинальной зоне (МЗ) (SI Приложение, рис.S2A). Это может быть связано с тем, что клетки Reln + являются одним из наиболее ранних кортикальных нейронов, которые дифференцировались до введения ТАМ (27).

    Рис. 3.

    Пренатальное введение ТАМ способствует преждевременному нейрогенезу и имеет длительные эффекты на кортикогенез у постнатального потомства. (A – D) Введение ТАМ на E10 увеличивало количество Reelin (Reln) положительных клеток Кахаля-Ретциуса на E12 (P = 0,0115, U-критерий Манна-Уитни, CTL n = 7, TAM n = 9) (шкала шкалы, 30 мкм.), Tbr1 + нейронов (P = 0.0037, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 8, TAM n = 7) (шкала, 30 мкм) и Mef2c + нейронов поверхностного слоя (P <0,0001, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 20 , ТАМ n = 20) (масштабная линейка, 20 мкм.). Анализ ISH показывает, что пренатальное воздействие ТАМ на E10 временно увеличивало общее количество Rbfox3 + постмитотических нейронов на E12 (P = 0,0354, U-критерий Манна-Уитни, CTL n = 10, TAM n = 10). (Масштабная шкала, 10 мкм.) Пунктирными линиями обозначена маргинальная зона (MZ) (A) или кортикальная пластинка (CP) (B и C).(E) ТАМ вводили на E8.5. Кортикальные нейроны были значительно уменьшены в мозге E18 (Rbfox3, P = 0,0262, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 17, TAM n = 18. Map2, P <0,0001, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 20, TAM n = 35). (Масштабная шкала, 80 мкм.) (F) Воздействие ТАМ на E8.5 нарушало корковый нейрогенез у потомков P30 (Rbfox3, P <0,0001, U-критерий Манна-Уитни, CTL n = 15, TAM n = 18. Tbr1, P = 0,0286, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 9, TAM n = 9). (Масштабная шкала, 100 мкм.) (G) Обработка ТАМ снизила сложность дендритов у потомков P30.Морфологию дендритов количественно оценивали с использованием функции филаментов Имариса; статистика обозначала количество точек ветвления (P = 0,0002, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 9, TAM n = 9). Справа показан увеличенный вид прямоугольных областей на двух левых панелях и модель поверхности для количественной оценки дендритов. (Масштабная шкала, 20 мкм.) (H) Пренатальное введение ТАМ (E8.5) изменило синаптическое образование у взрослых потомков. Пресинаптические окончания идентифицировали окрашиванием синапсином (красный цвет). Постсинаптические структуры идентифицировали по окрашиванию большого диска MAGUK каркасным белком 4 (Dlg4 [PSD95]) (зеленый цвет).Дендриты метили окрашиванием Map2 (синий цвет). Синапсы идентифицировали по близости пре- и постсинаптических элементов (≤1 мкм) (P = 0,0004, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 10, TAM n = 10). (Шкала, 1 мкм.) *, 0,01 ≤ P <0,05; ** P <0,01.

    Долгосрочные эффекты пренатального воздействия ТАМ на послеродовое потомство.

    Чтобы оценить потенциальные долгосрочные эффекты воздействия ТАМ на корковый нейрогенез, мы вводили ТАМ беременным самкам перед закрытием нервной трубки (E8.5) и исследовали корковый нейрогенез на ст. E18 и на 30-е сутки после рождения (P30). Лечение ТАМ резко уменьшило толщину кортикальной пластинки (Карта 2: CTL = 478 ± 40 мкм, ТАМ = 355 ± 32 мкм; среднее ± стандартное отклонение) и количество кортикальных нейронов в потомстве E18 (Rbfox3: CTL = 54 ± 7%, ТАМ = 41 ± 11%; среднее ± стандартное отклонение) и у потомства P30 (Rbfox3: CTL = 65 ± 5%, TAM = 58 ± 3% и Tbr1: CTL = 57 ± 5%, ТАМ = 43 ± 3%; среднее ± SD) (рис. 3 E и F). В гиппокампе пренатальное лечение ТАМ также вызывало незначительное уменьшение количества клеток в CA1 и DG (приложение SI, рис.S2B). Поразительно, что введение ТАМ на ст. E8.5 серьезно нарушило сложность апикальных дендритов в мозге P30, особенно в маргинальной кортикальной зоне (CTL = 1,3 ± 0,3 дендритных фрагментов / мкм 3 , TAM = 0,8 ± 0,013 дендритных фрагментов / мкм 3 ; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 3G). Более того, синаптическая плотность была снижена в коры головного мозга, обработанной ТАМ (CTL = 0,15 ± 0,06 точек / мкм 2 , TAM = 0,06 ± 0,03 точек / мкм 2 ; среднее значение ± стандартное отклонение) (рис. 3H). Введение ТАМ на E13 (пиковый период кортикального нейрогенеза) аутбредной линии мышей (CD1) и линии трансгенных мышей (Prom1-CreER / ZsGreen) также показало снижение количества кортикальных нейронов (приложение SI, рис.S2 C и D), предполагая, что лечение ТАМ оказывает длительное воздействие на корковый нейрогенез независимо от генетического фона.

    В дополнение к кортикальному нейрогенезу у потомков P30, получавших E8.5 TAM, наши данные показали значительное снижение процента олигодендроцитов Olig2 + в мозолистом теле, определяемое окрашиванием Cnp и Mbp. По сравнению с контролем, иммуноокрашивание Cnp и Mbp показало, что лечение ТАМ вызывало нерегулярную организацию пучка аксонов и серьезно уменьшало расширение мозолистого тела, где комиссуральные волокна соединяют левое и правое полушария (Приложение SI, рис.S3A). Мы наблюдали статистически незначимое снижение количества астроцитов Gfap + в мозолистом теле, в то время как количество астроцитов Aldoc + оставалось неизменным в коре головного мозга (приложение SI, рис. S3 B и C).

    Пренатальное воздействие ТАМ нарушило передачу сигналов Wnt, которая, как было показано, сильно коррелирует с поддержанием, дифференцировкой и формированием кортикального паттерна нейронных предшественников.

    Чтобы выявить лежащие в основе молекулярные механизмы, мы выполнили анализ регуляторной сети генов NPCs и кортикальных гемоцитов с использованием инструментария bigSCale2 для идентификации генов-концентраторов, которые ТАМ использует для управления кортикогенезом (28).Мы выбрали для анализа кластеры NPC1 / 2 и CH из-за тесной связи между пролиферацией VZ NPC и кортикальным нейрогенезом. Было показано, что кортикальный рубец, один из основных организаторов формирования паттерна мозга, регулирует формирование кортикального паттерна (22, 29).

    Мы обнаружили четыре основных сетевых модуля в CTL- и три модуля в TAM-обработанных клетках (рис. 4 A, слева). По сравнению с CTL, сеть TAM показала более низкие границы плотности узлов (CTL = 6,89, TAM = 4,92) и модульность (CTL = 0,61, четыре модуля, TAM = 0.29, три модуля), предполагая, что сеть CTL сохранила более сильную внутримодульную связь и более высокую гетерогенность экспрессии генов. Анализ обогащения онтологии генов (GO) показал, что четыре модуля в CTL состоят из генов, в основном связанных с развитием переднего мозга, делением клеток, развитием клеточного цикла и биогенезом рибонуклеопротеинового комплекса (рис. 4 A, вверху справа). По сравнению с CTL, обработка ТАМ уменьшила обогащение ГО до трех модулей, состоящих из генов, связанных с сборкой проекций и передачей сигналов Wnt, делением клеток и биогенезом рибонуклеопротеинового комплекса (рис.4 A, внизу справа). Гены прогрессии клеточного цикла не были обогащены ГО в образце, обработанном ТАМ, что позволяет предположить, что экспрессия генов, контролирующих развитие клеточного цикла, в значительной степени нарушена. При более внимательном рассмотрении было обнаружено, что центральное место в рейтинге страниц дифференциально экспрессируемых генов-концентраторов (оранжево-красный цвет и синий цвет) было снижено случайным образом в пределах генной регуляторной сети TAM-обработанных NPC и клеток CH (рис. 4 A, слева). Один из самых ярких примеров - модуль развития переднего мозга.Регуляторные сети генов-концентраторов в этом модуле, такие как Dmrta2, Wnt8b, Emx2 и Dmrt3, были сильно изменены в клетках, обработанных ТАМ. Гены (узлы), напрямую связанные с Dmrta2 и Wnt8b, были уменьшены с 62 в CTL до 17 в клетках, обработанных TAM, и с 109 до 57, соответственно, что указывает на ослабленные взаимодействия ген-ген в клетках, обработанных TAM. Эти гены-концентраторы являются критическими компонентами множества путей, которые регулируют поддержание нейральных предшественников, корковый нейрогенез и формирование коркового паттерна (т.e., Wnt, BMP и Notch пути) (17, 22).

    Рис. 4.

    Пренатальное введение ТАМ нарушило сигнальные пути Dmrta2-Hes1, Wnt и Bmp. (A) Слева показан анализ регуляторной сети генов CTL и TAM для scRNA-seq кластеров NPC и CH. Размер узла пропорционален его центральности в рейтинге страниц. Оранжево-красные (CTL) и синие (TAM) точки показывают гены на пересечении трех наборов генов: 1) первые 200 дифференциально экспрессируемых генов, идентифицированных с использованием функции FindAllMarkers пакета Seurat между CTL и TAM; 2) 200 лучших генов с наибольшим изменением абсолютного значения рейтинга страниц между CTL и TAM; 3) гены с более чем 0.95 квантиль центральности рейтинга страниц. Справа показано обогащение GO генов с наиболее затронутым центральным рейтингом страниц. Гены, перечисленные в сетевом анализе (слева), имеют оранжево-красный (CTL) и синий (TAM) цвета в анализе обогащения GO. (B) Точечный график показывает, что пренатальное введение ТАМ уменьшило количество клеток, экспрессирующих Wnt8b, Dmrta2, Hes1, Lrp6, Acvr2b и Sox3. (C) Обработка ТАМ увеличивала экспрессию Wnt8b латерально в коре головного мозга (P <0,0001, двусторонний дисперсионный анализ ANOVA, box1, P = 0,0047; box2, P = 0.0012; box3, P = 0,2137; box4-6, P> 0,9999; box7, P = 0,4281; box8, P = 0,0008; box9, P = 0,0003. CTL n = 9, ТАМ n = 9). Кора головного мозга над CH была разделена непрерывными ячейками, и точки окрашивания ISH были количественно определены в каждой ячейке. Увеличенные изображения справа показывают бункеры-7 и -8. Н.С., несущественно. (Шкала, 100 мкм). Анализы ISH показывают снижение экспрессии мРНК Lrp6, Dmrta2, Hes1 и Sox3 в мозге, обработанном ТАМ (Lrp6, P = 0,0023, CTL n = 12, TAM n = 18; Dmrta2, P <0,0001. , CTL n = 15, ТАМ n = 15; Hes1, P <0.0001, CTL n = 15, TAM n = 17; Sox3, P <0,0001, CTL n = 12, TAM n = 12). (Шкала 200 мкм.) *, 0,01 ≤ P <0,05; ** P <0,01.

    Интересно, что недавнее исследование Young et al. показали, что Dmrta2, новый Wnt-зависимый фактор транскрипции, регулирует Hes1 и др. пронейральные гены, чтобы поддерживать судьбу NPC (17). Emx1-Cre условный нокаут Dmrta2 ускоряет выход из клеточного цикла, увеличивает количество клеток Eomes + и способствует временной дифференцировке нейронов. В соответствии с этим доказательством более раннее исследование Nakamura et al.показали, что Hes1 нулевые мыши демонстрируют преждевременную дифференцировку клеток-предшественников и снижение активности самообновления мультипотентных предшественников (16). Эти фенотипы несколько напоминают наши результаты в мозге, обработанном ТАМ. Анализ scRNA-seq показал, что уровни экспрессии Wnt8b, Dmrta2, нижестоящей мишени Hes1 Dmrta2, субъединицы рецептора Wnt, Lrp6 и субъединицы рецептора Bmp, Avcr2b, были снижены в TAM-обработанных NPC и / или клетках CH (фиг. . 4B). Наши анализы ISH показывают, что обработка ТАМ на E10 резко снижает уровни экспрессии Wnt8b, Lrp6, Dmrta2, Hes1 и Avcr2b в коре головного мозга на E12 (среднее количество точек на клетку, Wnt8b: bin1, CTL = 4.7 ± 0,30, ТАМ = 3,5 ± 0,16; bin2, CTL = 4,7 ± 0,18, ТАМ = 3,4 ± 0,20; bin8, CTL = 1,7 ± 0,58, TAM = 3,0 ± 0,96; bin9, CTL = 0,58 ± 0,10, TAM = 2,0 ± 0,37 и Lrp6: CTL = 8,5 ± 1,1, TAM = 7,0 ± 1,1 и Dmrta2: CTL = 8,7 ± 1,7, TAM = 5,7 ± 0,9 и Hes1: CTL = 9,4 ± 0,7, ТАМ = 6,0 ± 0,9 и Avcr2b: CTL = 9,8 ± 1,4, ТАМ = 6,4 ± 1,6; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 4C и приложение SI, рис. S5A). Мы также подтвердили снижение экспрессии маркера нейрального предшественника Sox3 в мозге, обработанном ТАМ (CTL = 7,6 ± 1,6 точек / клетка, ТАМ = 5.2 ± 1,2 пункта / ячейка; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 4C) (30).

    Было показано, что наряду с поддержанием судьбы нейральных предшественников, Dmrta2 участвует в формировании коркового паттерна (31, 32). Используя обычную нулевую линию мышей по Dmrta2, Saulnier et al. показали, что в основных центрах формирования телэнцефального паттерна, верхней пластинке и кортикальном рубце потеря Dmrta2 приводит к снижению экспрессии сигнальных генов Wnt и BMP, таких как Wnt8b (31). Наш анализ scRNA-seq показал, что обработка ТАМ нарушает регуляцию экспрессии Wnts, Bmps, их рецепторов и цитоплазматических модуляторов в NPC и клетках кортикального рубца (рис.4 A – C и Приложение SI, рис. S4). Мы обнаружили, что лечение ТАМ увеличивало экспрессию Wnt8b от вентрально-медиальных до дорсально-латеральных областей (Рис. 4C). Следовательно, нарушение регуляции путей Wnt и BMP может быть одним из основных механизмов, которые контролируют изменения кортикального паттерна в мозге, обработанном TAM.

    Таким образом, наши данные показали, что введение ТАМ изменяет ландшафт регуляторной сети генов в NPCs и CH клетках за счет уменьшения внутримодульной связности и неоднородности экспрессии генов.В частности, введение ТАМ на ранней стадии коркового нейрогенеза резко ослабляет сигнальную сеть Wnt. В дополнение к регуляции Wnt и Dmrta2 анализ scRNA-seq показал, что ТАМ также нарушает экспрессию генов, которые, как было показано, участвуют в других сигнальных путях, таких как Fgf (например, Ptpn11), Notch (например, Hes5, Snw1, Ctbp1, Ctbp2, Hdac1 и Hdac2) и sonic hedgehog (Shh) (например, Prkar1a и Smo) (приложение SI, рис. S4).

    TAM, непосредственно регулируемое распространение и дифференциация нейронов посредством передачи сигналов Wnt-Dmrta2.

    Чтобы продемонстрировать причинный эффект путей Wnt и BMP на пролиферацию и дифференцировку NPC, мы провели анализы восстановления с использованием двух агонистов Wnt (агониста Wnt 1 и HLY78) и агониста BMP (SJ000291942). Агонист 1 Wnt является активатором сигнального пути pan-Wnt, который индуцирует Ctnnb1 (β-катенин) - и Tcf-зависимую транскрипционную активность (33). HLY78 усиливает ассоциацию Axin-Lrp6 и, таким образом, способствует фосфорилированию Lrp6 и передаче сигнала Wnt (34). SJ000291942 активирует канонический сигнальный путь BMP (35).

    Отдельные клетки диссоциировали из коры головного мозга мышей E11 и культивировали с активным метаболитом ТАМ, 4-гидрокситамоксифеном (4-ОН-ТАМ) и одним из агонистов in vitro в течение 16 часов. Клетки пары нейронов и NPC были обнаружены с помощью иммуноокрашивания Tubb3 и Nes (клетки пары нейронов, N / N; пара клеток NPC, P / P) (фиг. 5 A, верхняя правая диаграмма). Парно-клеточный анализ показал, что 4-OH-TAM продуцировал больше нейронных парных клеток (отношение N / N: CTL = 0,48 ± 0,08, 4-OH-TAM = 0,73 ± 0,3; среднее ± SD), чем в контроле, и уменьшил количество пар предшественников (соотношение P / P: CTL = 0.49 ± 0,08, 4-ОН-ТАМ = 0,16 ± 0,2%; среднее ± стандартное отклонение) (фиг. 5A). Добавление агонистов Wnt спасало эффекты ТАМ на пролиферацию и дифференцировку клеток-предшественников (соотношение P / P: CTL = 0,49 ± 0,08, 4-OH-TAM и агонист Wnt 1 = 0,44 ± 0,23, 4-OH-TAM и HLY78 = 0,54 ± 0,1 Отношение N / N: CTL = 0,48 ± 0,08, 4-OH-TAM и агонист Wnt 1 = 0,37 ± 0,18, 4-OH-TAM и HLY78 = 0,43 ± 0,11; среднее ± SD) (рис. 5A и приложение SI, Рис. S5B). Мы наблюдали меньший эффект спасения при использовании агониста BMP, SJ000291942 в NPC, обработанных 4-OH-TAM (соотношение P / P: 4-OH-TAM и SJ000291942 = 0.73 ± 0,2; Отношение N / N: 4-OH-TAM и SJ000291942 = 0,27 ± 0,19; среднее ± стандартное отклонение) (Приложение SI, рис. S5B). Количество асимметрично делящихся клеток (P / N) существенно не изменялось во всех условиях. Ожидается, что общее количество клеток Mki67 + в NPC E11, обработанных 4-OH-TAM, также уменьшилось (SI Приложение, Рис. S5C).

    Рис. 5.

    TAM напрямую влияет на путь передачи сигналов Wnt-Dmrta2, регулируя спецификацию судьбы NPC. (A) Анализ парных клеток показал, что обработка кортикальных NPC E11 агонистами Wnt, агонистом Wnt 1 и HLY78 устраняет эффекты 4-OH-TAM на спецификацию судьбы NPC E11 (P / P: CTL vs.4-ОН-ТАМ, Р <0,0001; CTL по сравнению с 4-OH-TAM и агонистом Wnt 1, P = 0,3821; CTL по сравнению с 4-OH-TAM и HLY78, P = 0,2123; CTL по сравнению с 4-OH-TAM и SJ00291942, P = 0,0031. N / N: CTL по сравнению с 4-OH-TAM, P <0,0001; CTL по сравнению с 4-OH-TAM и агонистом Wnt 1, P = 0,1154; CTL по сравнению с 4-OH-TAM и HLY78, P = 0,3084; CTL по сравнению с 4-OH-TAM и SJ00291942, P = 0,0015. N / P: CTL против 4-OH-TAM, P = 0,8399; CTL против 4-OH-TAM и агониста Wnt 1, P = 0,1000; CTL по сравнению с 4-OH-TAM и HLY78, P = 0,6063; CTL против 4-OH-TAM и SJ00291942, P = 6728. U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 34, 4-OH-TAM n = 33).(Шкала 5 мкм.) N - нейрон; P, прародитель. Tubb3, нейрон-специфический β-тубулин класса III; Нес, нестин. (B) Сверхэкспрессия Dmrta2 в обработанных 4-OH-TAM NPC спасала пролиферацию и дифференцировку клеток (P / P: GFP CTL против Dmrta2OE, P = 0,0002; GFP CTL против 4-OH-TAM, P <0,0001; GFP CTL против Dmrta2OE / 4-OH-TAM, P = 0,1463. N / N: GFP CTL против Dmrta2OE, P <0,0001; GFP CTL против 4-OH-TAM, P <0,0001; GFP CTL против Dmrta2OE и 4 -OH-TAM, P = 0,1467. P / N: GFP CTL по сравнению с Dmrta2OE, P = 0,0421; GFP CTL по сравнению с 4-OH-TAM, P = 0.8749; GFP CTL в сравнении с Dmrta2OE и 4-OH-TAM, P = 0,4412. GFP CTL, n = 12; 4-ОН-ТАМ, n = 12, U-критерий Манна – Уитни). (Шкала, 20 мкм.) *, 0,01 ≤ P <0,05; ** P <0,01. Н.С., несущественно.

    Чтобы дополнительно продемонстрировать функцию критического гена Dmrta2 в регуляции дифференцировки клеток, мы инфицировали NPC E11 сверхэкспрессией Dmrta2 (Dmrta2OE) и отрицательными контрольными лентивирусными частицами GFP. Экспрессия Dmrta2 и GFP (Dmrta2-IRES2-GFP) управлялась промотором EF-1α. Через 4 дня мы заменили Dmrta2 со сверхэкспрессией и контрольные NPC в одноклеточной плотности и добавили 4-OH-TAM.Через 16 часов мы выполнили иммуноокрашивание и количественно оценили количество клеток NPC и нейрональных пар (рис. 5B, левая диаграмма). Мы обнаружили, что сверхэкспрессия Dmrta2 в NPC, происходящих из коры головного мозга E11, противодействовала влиянию ТАМ на спецификацию судьбы NPC (соотношение P / P: CTL = 0,53 ± 0,05, Dmrta2OE = 0,65 ± 0,08, 4-OH-TAM = 0,39 ± 0,05, Dmrta2OE и 4-OH-TAM = 0,50 ± 0,06%. Соотношение N / N: CTL = 0,38 ± 0,06, Dmrta2OE = 0,24 ± 0,07, 4-OH-TAM = 0,52 ± 0,06, Dmrta2OE и 4-OH-TAM = 0,42 ± 0,08; среднее ± стандартное отклонение) (фиг. 5B).

    В качестве доказательства принципа мы показали тесную связь между TAM и регуляторной осью Wnt8b-Dmrta2 в регуляции спецификации судьбы NPC.Лечение ТАМ нарушает регуляцию этого пути и приводит к дефициту кортикального нейрогенеза и формирования паттерна у пренатального и постнатального потомства.

    ТАМ ингибировал пролиферацию взрослых нервных клеток-предшественников как в SVZ, так и в DG.

    В нескольких исследованиях у взрослых мышей сообщалось об острых, но непродолжительных эффектах лечения ТАМ на передвижение, исследование, тревожное поведение, обучение и память у мышей (36–39). Чтобы изучить потенциальное влияние ТАМ на нейрогенез взрослых мышей, мы использовали установленный 5-дневный протокол, который использовался для нацеливания на CreER / LoxP-зависимых генов у взрослых мышей (40).Мы вводили 2 мг ТАМ / день самцам мышей C57BL / 6 в возрасте 3-4 недель непрерывно в течение 5 дней. Одна доза BrdU была введена на второй день инъекции ТАМ. Мозг анализировали через 5 дней после последнего введения ТАМ. Мы обнаружили, что ТАМ значительно снижает количество пролиферирующих клеток, меченных BrdU и Mki67, в SVZ (BrdU: CTL = 12,1 ± 3,8%, TAM = 7,2 ± 2,3% и Mki67: CTL = 17,7 ± 3,6%, TAM = 11,7 ±. 4,6%; среднее ± стандартное отклонение) и в DG (BrdU: CTL = 16,1 ± 4,7, TAM = 7,1 ± 2 и Mki67: CTL = 13,2 ± 5.2, ТАМ = 7,2 ± 3,4; среднее ± стандартное отклонение) (фиг. 6А). Чтобы проверить эффект дозировки ТАМ, мы снизили дозу ТАМ до 1 мг / животное в день, а частоту лечения ТАМ до двух инъекций. Мыши получили две инъекции BrdU через 12 и 24 ч после первого введения ТАМ. Образцы головного мозга анализировали через 96 ч после первоначальной инъекции ТАМ. Мы наблюдали такой же эффект снижения пролиферирующих клеток в SVZ хвостатой скорлупы, что и в группе с высокой дозировкой ТАМ (BrdU: CTL = 27,3 ± 9,4%, ТАМ = 15,4 ± 6.1% и Mki67: CTL = 26,4 ± 3,7%, TAM = 21,6 ± 3,0%; среднее ± стандартное отклонение) (рис. 6В). После 5 дней лечения ТАМ (2 мг / животное / день) обнаруживаемого апоптоза клеток не наблюдалось (приложение SI, рис. S6A), а введение ТАМ не привело к значительному изменению общей сложности дендритов во взрослом мозге (приложение SI, рис. S6B). .

    Рис. 6.

    ТАМ ингибирует пролиферацию взрослых нервных стволовых клеток как в SVZ переднего мозга, так и в DG гиппокампа. (A) Мышам в возрасте 3-4 недель вводили 2 мг ТАМ в день в течение 5 дней подряд.BrdU вводили на второй день инъекции ТАМ. Образцы собирали через 10 дней после первоначального введения ТАМ (вверху слева). Обработка ТАМ резко снизила количество клеток, экспрессирующих BrdU или Mki67 в SVZ (BrdU, P <0,0001, U-критерий Манна-Уитни, CTL n = 23, TAM n = 24; Mki67, P = 0,0181, U-критерий Манна-Уитни, CTL n = 15, TAM n = 15) и в DG (BrdU, P <0,0001, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 12, TAM n = 12; Mki67, P = 0,0028, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 12, ТАМ n = 12).(Масштабная шкала, 50 мкм.) LV, боковой желудочек; HPC, гиппокамп. (B) Мышам в возрасте 3-4 недель вводили две дозы ТАМ (1 мг / мышь) с интервалом в 12 часов. BrdU вводили через 12 и 24 ч после первой инъекции ТАМ. Образцы собирали через 96 ч после первоначального введения ТАМ. Обработка ТАМ уменьшала количество клеток BrdU + и Mki67 + в SVZ (BrdU, P = 0,0187, U-критерий Манна – Уитни, CTL n = 36, TAM n = 31; Mki67, P = 0,0021, Mann– U-критерий Уитни, CTL n = 36, TAM n = 31).(Шкала, 50 мкм.) *, 0,01 ≤ P <0,05; ** P <0,01.

    Обсуждения

    В текущем исследовании мы показали, что однократное пренатальное воздействие ТАМ резко меняет глобальный ландшафт экспрессии генов в клетках полушария головного мозга и оказывает долгосрочное влияние на корковый нейрогенез, формирование паттерна и формирование нервных цепей. у перинатального и послеродового потомства.

    Нормальное развитие коры требует периода обширной пролиферации NPC, сопровождающейся дифференцировкой.Обеспечение точной координации между делением клеток, выходом из клеточного цикла и дифференцировкой важно для генерации разнообразных функциональных нейронов и глиальных клеток (41). Было продемонстрировано, что фаза G1 имеет решающее значение для определения судьбы клеток, и почти все регуляторы G1 влияют на нейрогенез (42). Young et al. показали, что потеря Dmrta2 увеличивает количество клеток в фазе G1 / G0 после 6-дневной дифференцировки мышиных NPC, снижает количество клеток в фазе S и увеличивает количество клеток, экспрессирующих Cdkn1b и Cdkn1c (17).Более того, Davidson et al. показали, что фосфорилирование Lrp6 регулируется циклин-зависимой киназой L63 и циклином Y в фазе G2 / M у Drosophila и Xenopus (43). В кортикальных NPC Pax6 + обработка ТАМ подавляла экспрессию генов циклина и Cdk, которые способствуют прогрессированию G1 / S и G2 / M. Обработка ТАМ увеличивала экспрессию генов остановки фазы G1, таких как Cdkn1c и Cdkn2d, в корковых нейронах новорожденных (приложение SI, рис. S7). Более того, ТАМ также подавляет экспрессию Gsk3b и Axin2, которые вместе с Ctnnb1, как было показано, накапливаются в центросоме, чтобы гарантировать правильное распределение хромосом во время фазы M (приложение SI, рис.S4) (44⇓ – 46). Эти данные предполагают, что ТАМ может подавлять развитие клеточного цикла, воздействуя на гены циклина / Cdk и гены передачи сигналов Wnt в NPC на ранних стадиях, таких как нейроэпителиальные клетки и радиальные глиальные клетки, в то время как он способствует экспрессии ингибиторов фазы G1 в NPC на более поздних стадиях, вероятно, промежуточные предшественники, и, таким образом, ведет к продолжительной фазе G1 и последующей повышенной экспрессии нейрональных генов и преждевременной нейрональной дифференцировке.

    Хорошо известно, что существуют критические периоды для установления определенных типов нейронной пластичности, и в это время люди наиболее уязвимы для внешних нарушений.Наше предыдущее исследование показало, что нарушение этого критического времени в пренатальном мозге оказывает пожизненное влияние на формирование корковой нейронной сети, обучение и поведение памяти у взрослых (47). В текущем исследовании мы показали, что однократное введение малых доз ТАМ на ранней стадии кортикального нейрогенеза (от E8 до E10) нарушает кортикальный нейрогенез, дендритный морфогенез, синаптическое образование, глиогенез и возможное образование аксонов у постнатального потомства (рис. F – H и SI Приложение, рис. S2B и 3A).Хотя доказательства того, что потеря Dmrta2 нарушает комиссуральные тракты аксонов и формирование таламокортикальных аксонов, могут объяснить дефекты образования аксонов в головном мозге, обработанном ТАМ (31), механизмы того, как ТАМ регулирует формирование дендритов и синапсов, все еще неуловимы. Наш анализ scRNA-seq эмбрионального мозга E12 может не раскрыть исчерпывающую картину влияния ТАМ на нейрогенез и формирование нервной цепи у постнатального потомства. Следовательно, необходимы подробные анализы scRNA-seq, специфичные для стадий развития, для дальнейшего анализа механизмов, лежащих в основе долговременных эффектов TAM.

    Эстрогены, как было показано, способствуют пролиферации и дифференцировке NPC, удлинению нейритов и формированию синапсов на более поздней стадии кортикогенеза (48–50). Похоже, что лечение ТАМ и эстрогенами показало несколько противоположные явления с точки зрения пролиферации и дифференцировки NPC, предполагая, что ТАМ может функционировать, вмешиваясь в сигнальный путь эстрогена. Наш анализ scRNA-seq показал, что экспрессия основных рецепторов эстрогена, рецептора эстрогена 1 (Esr1), Esr2, бета-рецептора, связанного с эстрогеном (Esrrb), и критического синтетического фермента эстрогена, ароматазы (Cyp19a1), не определялась.Уровни экспрессии двух других рецепторов эстрогена, связанного с эстрогеном рецептора альфа (Esrra) и рецептора эстрогена 1, связанного с G-белком (Gper1), были чрезвычайно низкими на E12 в конечном мозге (приложение SI, рис. S8A), что указывает на то, что ТАМ может функционировать. через независимый от рецептора эстрогена механизм в регулировании судьбы клеток и нейронных сетей. С этой целью мы исследовали экспрессию независимых от рецепторов эстрогена, регулируемых ТАМ генов в наших данных E12 scRNA-seq (51, 52). Обработка ТАМ незначительно нарушала экспрессию генов, не зависящих от рецепторов эстрогена, которые регулируют развитие клеточного цикла (например,g., Cdk2, Cdk7, Cdk9 и Ccnd1), нейрогенез и образования дендритов и аксонов (SI Приложение, Рис. S8B). Например, обработка ТАМ снижала экспрессию критических компонентов сигнального пути Fgf (например, Fgfr1) и пути Akt-mTOR (например, Akt1 и Mtor) на уровне экспрессии и процентном содержании клеток, что может блокировать пролиферацию NPC (53⇓⇓⇓– 57) и нарушают спецификацию клеточной судьбы (56, 58–62). Более того, множество доказательств показало, что нарушение путей mTOR и Fgf сильно нарушает сборку нервных цепей, включая образование аксонов (63⇓-65), дендритный морфогенез (66, 67) и синаптическое образование (68, 69).Вместе взятые, оказывается, что лечение ТАМ может влиять на кортикогенез через рецептор-независимый способ эстрогена на ранних и средних стадиях нейрогенеза.

    Система CreER / LoxP, индуцируемая ТАМ, заложила основы важных открытий в картировании судеб взрослых и эмбриональных нервных стволовых клеток (2, 10, 11, 70), функциях генов (71), а также подтипах нейронов и зависимостях от активности. нейронная схема (72⇓ – 74). Похоже, что побочным эффектом ТАМ может быть уязвимая ахиллесова пята для TAM-индуцированного отслеживания клонов клеток CreER / LoxP и / или исследований генетического нацеливания.Поэтому следует проявлять особую осторожность при использовании системы CreER / LoxP для изучения нейронного происхождения, поскольку ее результаты нельзя опровергнуть из-за отсутствия соответствующих средств контроля.

    Молекулярные механизмы тамоксифен-ассоциированного рака эндометрия (Обзор)

    1. Введение

    Тамоксифен остается адъювантным препаратом первой линии для пациентов с пременопаузальным раком молочной железы с рецептором эстрогена-α (ERα) положительные опухоли и часто назначаются в постменопаузе. самки с опухолями ERα +.Тамоксифен действует как антагонист ERα и блокирует его сигнальный путь в клетках рака молочной железы ERα +. Риск рецидива рака груди и риск Тамоксифен значительно снижает риск рака контралатеральной молочной железы лечение. Пять лет лечения тамоксифеном снизили риск рецидив через 10 лет на 37% у женщин в возрасте 50–59 лет и на 54% у женщин в возрасте 60–69 лет. Недавно проведенное исследование показало, что для пациенты с ERα + раком молочной железы, продолжающие прием тамоксифена до 10 лет вместо того, чтобы прекращать производство через пять лет, производит дальнейшее снижение частоты рецидивов и смертности (1).После его введения в 1970-е годы тамоксифен прописывали миллионам пациентов с ERα + рак груди, на который приходится ~ 70% всех случаев рака груди пациенты (2). Тамоксифен сейчас доступен в качестве дженерика во всем мире, что сделало его единственным самый назначаемый препарат в мире для лечения любого рака (2). В 1998 году Управление по контролю за продуктами и лекарствами США Администрация также одобрила тамоксифен как средство от рака груди. профилактический препарат для групп пациентов высокого риска, увеличивающий количество женщин, которым назначают тамоксифен и дальше.

    Хотя тамоксифен чрезвычайно эффективен лечение рака груди, у этого препарата также есть серьезная сторона эффекты. Один из самых значительных и пагубных побочных эффектов лечения тамоксифеном в постменопаузе - это его способность увеличивать вероятность развития у пациента поражений эндометрия, в том числе гиперплазия, полипы, карциномы и саркомы (3). Повышенный риск эндометрия рак варьируется между исследованиями, от 1,5 до 6,9 раз (4). Риск рака эндометрия не связан с суточной дозировкой тамоксифена, но с более длительная продолжительность и накопительное использование (5).Риск рака эндометрия у Пользователи тамоксифена значительно увеличиваются с увеличением массы тела среди женщин в постменопаузе (6).

    Независимо от приема тамоксифена, рак груди пациенты имеют повышенный риск пролиферации эндометрия расстройства, включая гиперплазию, на что указывает высокий распространенность данной патологии у больных раком груди пройти оценку эндометрия до начала введение тамоксифена (7,8). В В недавнем исследовании исходная гистероскопическая оценка показала заболеваемость 31.3% от общей заболеваемости эндометрием при бессимптомном течении постменопаузальные ERα + пациенты с раком молочной железы (9). Пациентам с эндометрием состояния, такие как гиперплазия без атипии до тамоксифена лечение, скорость перехода к более поздней стадии поражения эндометрия составляют почти 50% после 24 месяцев приема тамоксифена администрация (10).

    Изначально рак эндометрия, вызванный тамоксифеном воздействия считались опухолями с хорошим прогнозом. Однако больше Недавние исследования показали, что у этих видов рака эндометрия есть относительно плохой прогноз.Рак эндометрия у пользователей тамоксифена часто относится к менее благоприятным морфологическим подтипам и таким образом может иметь повышенную смертность (1). Трехлетний рак эндометрия удельная выживаемость значительно снижается с 94% для непользователей до 76% для пользователей тамоксифена старше пяти лет (5). В большом исследовании случай-контроль риск и прогноз рака эндометрия после применения тамоксифена при раке груди произошел рак эндометрия III и IV стадии чаще у лиц, длительно принимающих тамоксифен, чем у лиц, не принимающих тамоксифен.В кроме того, у долгосрочных пользователей значительно выше риски развивающиеся злокачественные смешанные мезодермальные опухоли или саркомы эндометрий, чем у тех, кто не принимал тамоксифен (15,4% против 2,9%; P <0,02). Выжившие после рака груди, у которых был рак эндометрия. гистологического типа высокого риска имели более длительную медианную продолжительность предшествующее использование тамоксифена по сравнению с пациентами с более низким риском гистологические типы (11).

    Поскольку чистая польза от тамоксифена значительно превышает риск, всемирное использование тамоксифена для лечения рака груди Ожидается, что пациенты будут продолжать лечение, особенно в качестве дженерика.Следовательно, снижение риска рака эндометрия тамоксифеном пользователи становятся все более важной целью профилактики рака. К сожалению, поскольку побочные эффекты рака эндометрия в о пользователях тамоксифена сообщалось в 1997 г., текущее понимание как воздействие тамоксифена влияет на ткань эндометрия и вызывает рак эндометрия остается ограниченным, несмотря на несколько механизмов предлагается. В этом обзоре кратко излагается текущий взгляд на возможные задействованные механизмы и перспективы на будущее исследования по предотвращению развития рака эндометрия у пользователей тамоксифена.

    2. Молекулярные механизмы тамоксифен-индуцированный рак эндометрия

    В отличие от большинства клеток рака молочной железы ERα +, тамоксифен вызывает рост клеток в раковых клетках эндометрия в пробирка. Несколько сигнальных путей, которые продвигают клетку пролиферация, включая митоген-активированную протеинкиназу (MAPK) пути, пути c-MYC и инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF1), были повышены после воздействия тамоксифена (12). В соответствии с наблюдаемыми эффектами в культуре клеток in vitro воздействие тамоксифена способствует пролиферация клеток эндометрия in vivo.Разовая инъекция тамоксифена сильно вызывал увеличение влажной массы матки и пролиферация в эндометрии через 16 часов после инъекции у мышей (13). Надежная индукция маркеры пролиферации, включая pRb, циклин D, циклин E, циклин A и циклин-зависимая киназа (CDK) 2 наблюдалась через 8–16 ч. постинъекция; снижение до базального уровня наступает к 48 ч (14). Клинические данные, сравнивающие эндометрий пользователей и непотребителей тамоксифена также указал, что Воздействие тамоксифена способствует разрастанию эндометрия.В индекс апоптоза / пролиферации, определяемый путем измерения маркер пролиферации Ki67 и маркеры апоптоза / антиапоптоза Fas, FasL и Bcl2 выше в доброкачественных поражениях эндометрия Пользователи тамоксифена по сравнению с теми, кто не принимал тамоксифен (15,16). Недавно было обнаружено, что миметик Bh4 ABT-737 частично противодействуют гиперплазии эндометрия, вызванной тамоксифеном (17). Комбинированное введение ABT-737 с тамоксифеном для мышей с тяжелым комбинированным иммунодефицитом для За 10 дней удалось обратить вспять увеличение веса матки, вызванное Только лечение тамоксифеном, возможно, через стимуляцию апоптоза.Однако молекулярный механизм действия миметиков Bh4 в блокирование эффектов тамоксифена требует дальнейшего изучения.

    В дополнение к пролиферации клеток тамоксифен имеет было показано, что способствует ремоделированию и миграции цитоскелета в клетки рака эндометрия. Воздействие тамоксифена вызывает очаговую адгезию фосфорилирование киназы (FAK) посредством регулируемого внеклеточными сигналами киназ (ERK) и передачи сигналов Src, что способствует миграции (18). Влияние тамоксифена на миграция клеток, по-видимому, зависит от передачи сигналов ER.В ERα положительный Клетки Исикавы, ингибирование ERα блокирует миграционные эффекты тамоксифен, тогда как в ER-отрицательных клетках рака эндометрия RL95-2, миграция опосредуется через рецептор 30, связанный с G-белком (GPR30) и путь ERK / FAK (19). В частности, тамоксифен не только способствует инвазии клеток рака эндометрия, он более чем вдвое увеличивает инвазию стромальных клеток эндометрия в трехмерная модель сокультуры (20). Паракринные факторы высвобождаются из стромальные клетки эндометрия способны стимулировать эпителиальный пролиферация клеток эндометрия (21), подчеркивая важность стромального клетки в канцерогенезе эндометрия.Эти результаты ясно продемонстрировать роль тамоксифена на стромальных клетках эндометрия и повысить вероятность того, что тамоксифен способствует раку эндометрия частично из-за его воздействия на строму.

    3. Повреждение ДНК, вызванное тамоксифеном

    Тамоксифен метаболизируется до множества метаболитов. с эстрогенными эффектами, а также с реактивными промежуточными продуктами, которые может образовывать аддукты белка или ДНК, вызывая повреждение ДНК. Следовательно, это была выдвинута гипотеза, что тамоксифен вызывает злокачественные новообразования за счет генотоксичность.Тамоксифен известен как сильный канцероген для печени в крысы (22-25) и высокая частота мутаций р53 обнаруживается в гепатокарциномах, вызванных воздействием тамоксифена (26). Внутрибрюшинный введение тамоксифена самкам мышей приводит к образованию аддуктов печеночной ДНК (27). Однако анализ аддуктов тамоксифен (Tam) -ДНК в эндометрии ткани пациентов, получавших тамоксифен, дали смешанные полученные результаты. В нескольких исследованиях не удалось обнаружить аддукты Там-ДНК в ткань эндометрия (28,29), в отличие от ряда других исследования (30,31).Кроме того, образование аддукта Там-ДНК был обнаружен в железистом и поверхностном эпителии после инкубация эксплантатов эндометрия человека с тамоксифеном (32). В то время как образование аддукта Там-ДНК возможно в тканях человека, неопровержимые доказательства того, что это приводит к рак эндометрия отсутствует. Кроме того, риск развития гепатоцеллюлярный рак минимален у женщин, получавших тамоксифен, и образование аддукта Там-ДНК в ткани эндометрия происходит на крайне низкий уровень и только у нескольких женщин.В соответствии с отсутствие эффектов повреждения ДНК на эндометрий, связанный с тамоксифеном ткань, крупномасштабная хромосомная сравнительная геномная гибридизация анализ, сравнивающий геномный профиль опухолей эндометрия из длительное (> 2 года) воздействие тамоксифена и отсутствие воздействия тамоксифена онкологические больные выявили, что геномные аберрации неразличимы в двух группах (33). Вместо этого геномные профили коррелирует с морфологическими подтипами опухолей эндометрия (33). Следовательно, важность генотоксичность как основной путь развития эндометрия, индуцированного тамоксифеном рак неясен.

    4. Влияние тамоксифена на гены-драйверы спорадический рак эндометрия

    Было показано, что несколько генов связаны с спорадический рак эндометрия. Один из самых распространенных генетических изменения - это мутация или потеря гетерозиготности в ген фосфатазы и гомолога тензина (PTEN), встречающийся в 35–50% рака эндометрия I типа. Другие распространенные изменения ДНК включают повышенную нестабильность микроспутников (MSI) из-за дефектов в генах семейства репарации несоответствия ДНК и генных мутациях в K-ras (34), β-катенин и p53.Мутация протоонкогена K-ras чаще всего встречается в кодонах 12 и 13 экзона 1 и обнаружен в 4,5–23% эндометрия. гиперплазия и в 18–26% карцином эндометрия (35,36). Мутации β-катенина присутствуют в 14–44% эндометрия I типа. раковые заболевания и мутации в MSI выявляются у 20–40% больных типа I карциномы эндометрия и часто сосуществуют с мутациями PTEN. Секвенирование и анализ генетических мутаций этих генов в образцы тканей тамоксифен-ассоциированного и спорадического эндометрия онкологические больные были проведены рядом исследовательских групп.В большинстве случаев пациенты, подвергшиеся воздействию тамоксифена, имели аналогичная частота мутаций в генах PTEN, p53 и MSI, как у не подвергшихся воздействию женщины с раком эндометрия (37–40).

    Частота мутации K-ras в связанном с тамоксифеном полипы эндометрия спорны; о заболеваемости сообщили быть высоким (43–64%) в некоторых случаях по сравнению с 4,5–23% наблюдается с непользователями (41,42). Кроме того, наличие мутации K-ras значительно зависит от продолжительности лечения тамоксифеном (43).Напротив, в других отчетах нет значительная разница наблюдалась между Пациенты, принимавшие и не лечившиеся тамоксифеном (37–39). Точно так же были отмечены более высокие показатели мутации или сверхэкспрессии р53. сообщается в нескольких исследованиях (5,39), но нет в других (44). β-катенин частота мутаций может быть повышена у женщин, получавших тамоксифен (38), однако результаты также непоследовательны. Вероятность увеличения тамоксифена частота рака эндометрия за счет усиления мутаций генов-драйверов для спорадический рак эндометрия низкий.Вместо этого тамоксифен длительно воздействие может способствовать канцерогенезу эндометрия преимущественно за счет негеномных изменений. Возможно, что тамоксифен предлагает клетки эндометрия, которые содержат уже существующие мутации - преимущество роста за счет эстрогенных и эпигенетических переделки. Результатом этих мероприятий является значительный увеличение заболеваемости раком эндометрия в долгосрочной перспективе пользователи тамоксифена.

    5. Эстрогенное действие тамоксифена

    В клетках рака груди тамоксифен действует как ER антагонист, конкурируя с эстродиолом за связывание и индуцируя конформационные изменения, которые блокируют взаимодействие ER с белки-соактиваторы (45).Однако, как селективный модулятор рецепторов эстрогена (SERM), тамоксифен действует как антагонист и / или агонист ER, в зависимости от на ткани-мишени и может модулировать передачу сигнала пути эстроген-чувствительных генов. В ткани эндометрия тамоксифен, как известно, оказывает эстрогенное действие.

    Один механизм, который может объяснить антагонизм и агонистические эффекты тамоксифена в различных тканях-мишенях - это дифференциальное привлечение ко-регуляторов к гену-мишени ER промоутер.В клетках рака молочной железы тамоксифен вызывает набор корепрессоров, корепрессоров ядерных рецепторов и молчания медиатор рецепторов ретиноидов и гормонов щитовидной железы к мишени ER промоторы (12). Однако в эндометрий, тамоксифен рекрутирует соактиваторы стероидного рецептора коактиватор-1 (SRC-1), усиленный при раке груди-1 (AIB1) и CREB-связывающий белок (CBP), а не корепрессоры, нацелены на ER ген (12). Ингибирование SRC-1 в Клетки Исикавы устранили экспрессию генов, индуцированную тамоксифеном (12).Этот дифференциал наем сорегулятора, по-видимому, ограничен целями ER, которые не содержат классический эстрогеновый ответный элемент (ERE) в своих промоторы, включая c-MYC и IGF1 (12). Тканзависимый механизм действия тамоксифена можно объяснить относительным обилием кофакторы в разных тканях (46). Уровень экспрессии ко-регуляторов таких как SRC-1, находится на низком уровне в клетках рака молочной железы MCF7 по сравнению с клетки эндометрия Ishikawa (12). Кроме того, активность SRC-1 регулируется киназой Src, которая высокоактивен в раковых клетках эндометрия по сравнению с молочной железой раковые клетки (47).Однако это механизм лишь частично объясняет различия, наблюдаемые между клетки рака груди и эндометрия, поскольку тамоксифен не проявляет агонистические эффекты во всех генах-мишенях эстрогена, что указывает на участие других молекулярных механизмов.

    А также влияет на транскрипционную активность ERα, тамоксифен, как было показано, регулирует уровни экспрессии ERα в эндометрии. Несколько исследований показали, что экспрессия ERα в доброкачественном эндометрии выше при раке груди пациенты, принимающие тамоксифен, по сравнению с пациентами, не принимающими тамоксифен (48,15), тем самым способствуя эстроген-опосредованному рост клеток.И наоборот, снижение экспрессии ERα на эндометрии также сообщалось о раке. Более 60% тамоксифена длительного приема пользователи имеют ERα-отрицательный эндометрий, тогда как только 26,2% непользователи являются ERα-отрицательными (5). Это наблюдение согласуется с данными о том, что мыши перорально дозированный тамоксифен на раннем этапе развития показал заметное снижение экспрессии ERα с отсутствием или очень слабым окрашиванием в эндометрий, строма и миометрий (49). Объяснение этого несоответствия может быть, что в клетках с пониженной регуляцией ERα повышенная регуляция другие варианты или изоформы сплайсинга ER при воздействии тамоксифена компенсировал потерю ERα.ER-α36, вариантная форма ERα, которая локализуется на плазматической мембране, было показано, что активируется в раковых клетках эндометрия (50). Экспрессия ER-α36 увеличивается с воздействием тамоксифена на клетки рака эндометрия (50). Кроме того, ER-α36 опосредует тамоксифен-индуцированные пути MAPK и Akt и необходимы для Тамоксифен-стимулированный рост клеток эндометрия (50).

    Кроме активации ядерных рецепторов эстрогена на индуцируют нижестоящую геномную передачу сигналов, также известно, что эстроген активируют быстрые негеномные сигнальные события независимо от ядерная ER.GPR30, сиротский рецептор, связанный с G-белком, был предложен как новый мембраносвязанный рецептор эстрогена, участвующий в быстрые негеномные эффекты эстрогена. Провода активации GPR30 к высвобождению фактора роста, связанного с гепарином (HB-EGF), который в в свою очередь, запускает рецептор эпидермального фактора роста человека (EGFR) / путь трансдукции MAPK (51). При раке эндометрия сверхэкспрессия GPR30 чаще встречается в тяжелой и поздней стадии опухоли и коррелирует с плохим прогнозом (52).

    Тамоксифен действует как агонист GPR30, стимулируя пролиферация и рост клеток. GPR30 опосредует тамоксифен стимулирующее действие на клетки карциномы эндометрия in vitro, возможно, за счет стимуляции фосфорилирования MAPK (53). Подавление GPR30 устраняет тамоксифен-стимулированная пролиферация клеток рака эндометрия (53). Что еще более важно, значимая корреляция между экспрессией GPR30 и выявлена ​​патология эндометрия, вызванная тамоксифеном (54). Когортное исследование, сравнивающее паттерн экспрессии GPR30 в ткани эндометрия из груди онкологические пациенты, получавшие тамоксифен или другой адъювант терапии, показали, что интенсивность экспрессии GPR30 была значительно коррелирует со временем между началом лечение тамоксифеном и развитие эндометрия нарушение.Среди пациентов с раком молочной железы, получавших тамоксифен, 43,8% показали полноценное окрашивание GPR30, тогда как только 13,6% были наблюдается в контрольной группе (54).

    6. Гены, регулируемые тамоксифеном, проявляют перекрывающийся, но отличный профиль по сравнению с целевыми генами эстрадиол

    Исследования с использованием различных модельных систем были проводится для систематического определения молекулярных путей под действием тамоксифена и эстрадиола in vitro и в естественным образом. Эти исследования показали, что, хотя перекрытие между генами, индуцированными тамоксифеном и эстрадиолом профили экспрессии, тамоксифен также регулирует свой собственный специфический набор генов в клетках эндометрия.

    В исследовании Tamm-Rosenstein et al (55) раковая клетка эндометрия Ishikawa линии обрабатывали тамоксифеном или эстрадиолом в течение 12 часов, после чего РНК-секвенирование. Воздействие тамоксифена изменило экспрессию 1013 гены. Из них только 224 (22%) гена перекрываются с эстрадиолом. лечение; все остальные были мишенями для гена, специфичного для тамоксифена, в пути, включая репликацию, рекомбинацию и репарацию ДНК, в в дополнение к прогрессированию клеточного цикла и клеточной сборке и организация. Примечательно, что хотя тамоксифен часто считается агонист эстрогена в клетках эндометрия, результаты транскриптома указывают на то, что тамоксифен является антагонистом и агонистом в отношении Клеточная линия Исикавы.Точно так же исследование с использованием первичных культур эпителиальных культур эндометрия человека показали, что большинство генов, измененных лечением тамоксифеном в течение 24 часов, были эстрогеннезависимый (56). Фонг и др. (13) вводили разовая доза тамоксифена или этинилэстрадиола для незрелых овариэктомированных мышей, и наблюдалось значительное увеличение маточного влажная масса через 24 ч. Анализ микроматрицы показал, что тамоксифен гены-мишени этинилэстрадиола перекрываются, но тамоксифен также независимо регулируемые гены, связанные с ростом клеток и пролиферация, организация цитоскелета, внеклеточный матрикс модификация, синтез нуклеотидов, репликация ДНК, белок синтез и обмен, метаболизм липидов, гликолиз и иммунологические ответы (13).Кроме того, микроматричный анализ тканей эндометрия пациента выявили, что 67% регулируемых тамоксифеном генов перекрываются с лечение эстрадиолом (13). В частности, эти исследователи обнаружили, что тамоксифен использует тот же набор клеточных гены цикла как эстрадиол, способствующие пролиферации клеток в ткань эндометрия, однако, в меньшей степени (57).

    Большинство экспериментов, направленных на понимание механизм рака эндометрия, вызванного тамоксифеном. с кратковременным воздействием тамоксифена, в диапазоне от 16 до 72 часов после одиночного приема администрация.Результаты, полученные с помощью этих методов, помогают в выявление непосредственных мишеней тамоксифена на эндометрии клетки. Однако связь заболеваемости раком эндометрия частота с продолжительностью воздействия тамоксифена указывает на то, что длительное воздействие тамоксифена оказывает дополнительное стимулирующее действие на канцерогенез эндометрия. Поскольку канцерогенез эндометрия - это прогрессирующее и не внезапное событие, кратковременное воздействие клетки эндометрия на тамоксифен вряд ли выявляют все сигнальные пути, которые имеют решающее значение для промотированного тамоксифеном рак эндометрия.Чтобы понять эффекты долгосрочного воздействие тамоксифена на ткань эндометрия, анализы гена профиль экспрессии на основе крупномасштабных клинических данных и экспериментов при длительном лечении тамоксифеном не требуется.

    На сегодняшний день только небольшие исследования по сравнению гена профили экспрессии тамоксифен-ассоциированного и спорадического рака эндометрия из образцов пациентов. В одно исследование, никаких различий в экспрессии генов не наблюдалось профиль, когда рак, вызванный тамоксифеном, был сопоставлен по степени и стадия рака эндометрия, не связанного с тамоксифеном; это может были связаны с небольшим количеством образцов опухоли (58).Однако другое исследование с на микрочипе ткани пациента, соответствующем стадиям, выявлено, что ген профили экспрессии в опухолях эндометрия различны в Пользователи тамоксифена по сравнению с лицами, не употребляющими тамоксифен (59). Неконтролируемая кластеризация всех генов во всех образцах выявлено, что опухоли от пациентов, которые использовали тамоксифен сгруппировался вместе и был отделен от образцов тем, кто никогда не принимал тамоксифен. Это исследование выявило 256 по-разному выраженные гены, большинство из которых были тамоксифен-специфичный. Примечательно, что некоторые из этих генных продуктов, включая p53, RelA, MYC, EGFR и β-катенин, имеют решающее значение. компоненты проводящих путей, которые, исходя из их нормальных физиологических функции, могут быть важны в канцерогенезе эндометрия (59).Кроме того, эти гены также было показано, что он активирует и модулирует резистентность к тамоксифену клетки рака молочной железы, что указывает на то, что длительное лечение тамоксифен может стимулировать аналогичные генные сети, способствующие развитию рака прогрессирование клеток эндометрия и преодоление чувствительности в груди раковые клетки.

    7. Путь передачи сигналов UPR-mTOR-аутофагия

    Исследование эндокринной резистентности при раке груди продемонстрировал, что сигнальный путь UPR часто активируется эндокринными терапевтическими вмешательствами (60).На эндоплазматическом ретикулуме (EnR) стресс, шаперонный белок GRP78 высвобождается из сенсора белки и, таким образом, активирует три различных звена пути UPR: IRE1-XBP1, PERK-eIF2α и ATF6. Путь UPR, способствующий выживанию: временно активируется для защиты клеток от стресса EnR в норме клетки; однако он часто постоянно активируется в раковых клетках, содействие выживанию. Компоненты UPR, такие как XBP1 и GRP78, являются высоко экспрессируется в эндокринно-устойчивых клетках рака молочной железы, которые подвергались длительному воздействию тамоксифена или фаслодекса (61,62).Фаслодекс - чистый антагонист ЭР, который активирует деградацию рецепторного белка. Активированный UPR играет важную роль в регуляции клеточной судьбы посредством модуляции апоптоз и аутофагия в клетках рака груди (61). Как последствия длительного приема тамоксифена воздействие на индукцию сигнального пути UPR в груди раковые клетки часто не зависят от ЭР, поэтому разумно предсказать что длительное воздействие тамоксифена может индуцировать передачу сигналов UPR в клетки эндометрия аналогичным образом. Активированная сигнализация UPR может способствовать выживанию клеток и уклонению от апоптоза, которые необходим для прогрессирования рака в ткани эндометрия.

    В соответствии с этой гипотезой лечение тамоксифеном индуцирует экспрессию стрессового шаперона EnR GRP78 в железистой и поверхностный эпителий в эксплантатах эндометрия человека, что указывает на активация сигнального пути стресса EnR / UPR в этих клетках (32). Наши предварительные данные, показывает, что ткань эндометрия, длительно лечившаяся тамоксифеном, крысы экспрессируют более высокие уровни компонентных генов UPR фосфора-eIF2α и CHOP по сравнению с контрольными крысами, не получавшими тамоксифен (неопубликованные данные), также поддерживают эту гипотезу.При раке груди клеток, GRP78, как было показано, модулирует активность mTOR для стимулирования аутофагия (61). Номер исследования показали, что сигнальный путь mTOR важен при тамоксифен-ассоциированном раке эндометрия. Среднее выражение mTOR у пациентов с тамоксифен-ассоциированным раком эндометрия был значительно выше по сравнению с группой без тамоксифена (63). Добавление mTOR ингибитор RAD001 (эверолимус) может предотвратить тамоксифен-ассоциированный гиперплазия эндометрия у мышей и значительно уменьшается окрашивание ядерным антигеном пролиферирующих клеток, вызванное тамоксифеном в эпителиальных и железистых клетках (64).Кроме того, RAD001 снижает пролиферация стромальных клеток эндометрия при лечении тамоксифеном мышей, которые, как известно, посылают паракринные сигналы, чтобы способствовать пролиферация эпителиальных клеток эндометрия (64). Дальнейшее расследование для определения роль сигнального пути стресса EnR-UPR-mTOR-аутофагия в тамоксифен-ассоциированный рак эндометрия, особенно после длительное воздействие, срочно требуется, чтобы получить представление о разработка стратегий профилактики рака для пациентов, принимающих тамоксифен.

    Блокировка путей, необходимых для эндокринная резистентность молочной железы и эндометрия, связанного с тамоксифеном канцерогенез имеет огромное значение при клиническом раке профилактика. Поскольку тамоксифен является доказанным эффективным терапевтическим и профилактический препарат от рака груди, направленный на два основных препятствия которые ограничивают его клиническое использование, имеют значительную пользу для груди онкологические больные. Сигнальный путь EnR стресс-UPR может быть идеальная цель, если доказано, что она имеет решающее значение для тамоксифен-ассоциированного рак эндометрия.Кроме того, накопление доказательств указывает на то, что что физиология и гомеостаз передачи сигналов EnR и UPR пути связаны с ожирением. В частности, IRE1α-XBP1 ветвь пути UPR, как было продемонстрировано, имеет решающее значение в метаболизм глюкозы и липидов в дополнение к функции инсулина. Ожирение является установленным фактором риска как рака груди, так и рак эндометрия. Следовательно, помимо прямого воздействия на эндокринная резистентность при раке груди и тамоксифен-индуцированном рак эндометрия, блокирование пути UPR может косвенно приносят пользу пользователям тамоксифена за счет ингибирования ожирение.

    8. Выводы

    Тамоксифен - наиболее широко используемый рак груди терапия и профилактические препараты во всем мире. Понимание молекулярные механизмы рака эндометрия, вызванного тамоксифеном, важно для определения стратегий по снижению риска развития рак эндометрия у пациентов с раком груди, проходящих лечение тамоксифен. Поскольку метаболиты тамоксифена могут быть генотоксичными, тамоксифен функционирует в основном через негеномные пути, чтобы продвигать канцерогенез эндометрия.Модуляция эстрогенных путей играет важную роль в опосредовании эффектов, способствующих пролиферации клеток тамоксифена в клетках эндометрия. Кроме того, тамоксифен известен регулировать генные мишени, не зависящие от эстрогена. Тем не мение, генные мишени или сети, специфичные для тамоксифена, которые необходимы при длительном воздействии тамоксифена рак эндометрия остается быть определенным. Недавние исследования и наши собственные данные показывают, что UPR и передача сигналов mTOR может быть значимой при длительном применении тамоксифена рак эндометрия, вызванный воздействием.Поскольку эти два пути также основные факторы, способствующие развитию эндокринной резистентности в клетки рака молочной железы, нацеленные на них, могут принести пользу при лечении тамоксифеном больных раком груди за счет снижения эндокринной резистентности, а также рак эндометрия после длительного использования. В большем масштабе данные клинического профиля генов и долгосрочные эксперименты с тамоксифеном с исследования на животных in vitro и in vivo необходимы для дополнительно прояснить участие этих двух путей и молекулярных механизмы, которые необходимы для эндометрия, связанного с тамоксифеном рак.

    Список литературы

    1

    Дэвис С., Пан Х., Годвин Дж. И др .; Адъювант Тамоксифен. Группа сотрудничества «Дольше против укороченного» (ATLAS): Долгосрочные эффекты продолжения адъювантного тамоксифена до 10 лет по сравнению с прекращением приема через 5 лет после постановки диагноза эстроген рецептор-положительный рак молочной железы: ATLAS, рандомизированное исследование. Ланцет. 381: 805–816. 2013. Просмотр статьи: Google Scholar:

    2

    Jordan VC: Тамоксифен: вестник нового эпоха профилактической терапии.J Natl Cancer Inst. 89: 747–749. 1997. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    3

    Джонс М.Э., ван Лиувен Ф.Е., Хоогендорн МЫ, и др.: Выживаемость рака эндометрия после рака груди в зависимости от к лечению тамоксифеном: объединенные результаты из трех стран. Грудь Cancer Res. 14: R2. Вид Статья: Google Scholar: PubMed / NCBI

    4

    Коэн I: патологии эндометрия связанные с лечением тамоксифеном в постменопаузе.Gynecol Oncol. 94: 256–266. 2004. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    5

    Бергман Л., Белен М.Л., Галле М.П., ​​Холлема H, Benraadt J и van Leeuwen FE: Риск и прогноз эндометрия рак после тамоксифена при раке груди. Комплексный рак Группа ALERT Центров по оценке рака печени и эндометрия Риск после приема тамоксифена. Ланцет. 356: 881–887. 2000. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    6

    Свердлоу Эй Джей и Джонс МЭ; Британский Вторая группа по изучению рака тамоксифена.Тамоксифен для лечения груди рак и риск рака эндометрия: исследование случай-контроль. J Natl Cancer Inst. 97: 375–384. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    7

    Берлиер М., Шарль А., Галант С. и Доннез J: Побочные эффекты тамоксифена со стороны матки: необходимость систематического предварительный скрининг. Obstet Gynecol. 91: 40–44. 1998. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    8

    Гарути Дж., Челлани Ф., Сентинайо Дж., Сита Дж., Nalli G и Luerti M: исходная оценка эндометрия до тамоксифен при раке груди у бессимптомных женщин в менопаузе.Gynecol Oncol. 98: 63–67. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    9

    Лопес Д.М., Фернандес Ю.Г., Санчес А.В., Альварес М.И., Рейнальдо М.И. и Дельгадо Р.К.: исходная гистероскопия оценка эндометрия у бессимптомных женщин в постменопаузе с эстроген-рецептор-положительный рак груди. Менопауза. 20: 64–71. 2013. Просмотр статьи: Google Scholar

    10

    Гарути Дж., Челлани Ф., Сентинайо Дж., Сита Дж., Nalli G и Luerti M: гистопатологическое поведение эндометрия гиперплазия во время терапии тамоксифеном рака груди.Гинеколь Онкол. 101: 269–273. 2006. Просмотр статьи: Google Scholar

    11

    Бланд А.Е., Калингерт Б., Секорд А.А. и др .: Взаимосвязь между применением тамоксифена и раком эндометрия высокого риска гистологические типы. Gynecol Oncol. 112: 150–154. 2009. Просмотр статьи: Google Scholar

    12

    Шан И и Браун М: Молекулярный детерминанты тканевой специфичности SERM. Наука.295: 2465–2468. 2002. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    13

    Фонг CJ, Burgoon LD, Williams KJ, Forgacs AL и Zacharewski TR: Сравнительный временной и дозозависимый морфологические и транскрипционные эффекты матки, вызванные тамоксифен и этинилэстрадиол у неполовозрелых мышей с удаленными яичниками. BMC Genomics. 8: 1512007. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    14

    Чжан Х., МакЭлрат Т., Тонг У. и Поллард JW: Молекулярная основа индукции тамоксифена в матке мышей пролиферация эпителиальных клеток.J Endocrinol. 184: 129–140. 2005 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    15

    Mourits MJ, Ten Hoor KA, van der Zee AG, Willemse PH, de Vries EG и Hollema H: Влияние тамоксифена на пролиферация и экспрессия стероидных рецепторов в постменопаузе эндометрий. J Clin Pathol. 55: 514–519. 2002. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    16

    Mourits MJ, Hollema H, de Vries EG, Ten Хор К.А., Виллемсе PH и Van Der Zee AG: Апоптоз и параметры, связанные с апоптозом, в отношении воздействия тамоксифена в постменопаузальном эндометрии.Hum Pathol. 33: 341–346. 2002 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    17

    Vaillant F, Merino D, Lee L и др.: Нацеливание на BCL-2 с помощью миметика Bh4 ABT-199 в эстрогенах рецепторно-положительный рак молочной железы. Раковая клетка. 24: 120–129. 2013. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    18

    Акконча Ф, Барнс Си Джей и Кумар Р. Эстроген и тамоксифен вызывают ремоделирование и миграцию цитоскелета в раковых клетках эндометрия.Эндокринология. 147: 1203–1212. 2006 г. Просмотр статьи: Google Scholar

    19

    Tsai CL, Wu HM, Lin CY и др.: Эстрадиол и тамоксифен вызывают миграцию клеток через GPR30 и активацию киназа фокальной адгезии (FAK) при раке эндометрия с низким или без ядерного рецептора эстрогена α (ERα). PLoS One. 8: e729992013. Просмотр статьи: Google Scholar

    20

    Тейлор А.Х., Калати В. и Хабиба М.: Эстрадиол и тамоксифен усиливают инвазию в строму эндометрия. клетки в трехмерной совместной модели аденомиоза.Удобрение Стерил. 101: 288–293. 2014. Просмотр статьи: Google Scholar

    21

    Кук П.С., Бьюкенен Д.Л., Янг П. и др.: Рецепторы стромальных эстрогенов опосредуют митогенные эффекты эстрадиола на эпителий матки. Proc Natl Acad Sci U S. A. 94: 6535–6540. 1997. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    22

    Уильямс GM, Ятропулос MJ, Джорджевич М.В. и Кальтенберг OP: Трифенилэтиленовый препарат тамоксифен является сильным канцероген печени у крыс.Канцерогенез. 14: 315–317. 1993 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    23

    Hard GC, Williams GM и Iatropoulos MJ: Тамоксифен и рак печени. Ланцет. 342: 444–445. 1993. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    24

    Картью П., Мартин Э.А., Уайт И.Н. и др.: Тамоксифен вызывает кратковременное кумулятивное повреждение ДНК и опухоли печени. у крыс: продвижение фенобарбиталом.Cancer Res. 55: 544–547. 1995. PubMed / NCBI

    25

    Hirsimäki P, Hirsimäki Y, Nieminen L и Payne BJ: Тамоксифен вызывает гепатоцеллюлярную карциному в печени крыс: 1-летнее исследование с двумя антиэстрогенами. Arch Toxicol. 67: 49–54. 1993. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    26

    Премьер-министр Ванкуцем, генеральный директор Лазаруса П. и Уильямса: Частые и специфические мутации гена p53 крысы в гепатокарциномы, вызванные тамоксифеном.Cancer Res. 54: 3864–3867. 1994 г., PubMed / NCBI

    27

    Ферр Б.Дж. и Джордан В.Ч .: Фармакология. и клиническое использование тамоксифена. Pharmacol Ther. 25: 127–205. 1984 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    28

    Кармайкл П.Л., Сардар С., Крукс Н. и др.: Отсутствие данных ВЭЖХ 32P-пост-мечения тамоксифен-ДНК аддукты в эндометрии человека. Канцерогенез.20: 339–342. 1999 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    29

    Беланд Ф.А., Черчвелл М.И., Дёрге Д.Р. и др. al: Электрораспылительная ионизация-тандемная масс-спектрометрия и 32P-постмаркированный анализ аддуктов тамоксифен-ДНК у людей. J Natl Cancer Inst. 96: 1099–1104. 2004. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    30

    Шибутани С, Равиндернатх А, Сузуки Н, Terashima I, Sugarman SM, Grollman AP и Pearl ML: Идентификация аддуктов тамоксифен-ДНК в эндометрии женщин, получавших тамоксифен.Канцерогенез. 21: 1461–1467. 2000. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    31

    Шибутани С, Сузуки Н, Терашима I, Sugarman SM, Grollman AP и Pearl ML: аддукты тамоксифен-ДНК обнаружен в эндометрии женщин, получавших тамоксифен. Chem Res Toxicol. 12: 646–653. 1999. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    32

    Андерссон Х, Хельместам М, Зебровска А, Olovsson M и Brittebo E: Тамоксифен-индуцированное образование аддуктов и клеточный стресс в железах эндометрия человека.Утилизация наркотиков. 38: 200–207. 2010. Просмотр статьи: Google Scholar

    33

    Fles R, Hoogendoorn WE, Platteel I и другие: Геномный профиль опухолей эндометрия зависит от морфологического подтипа, а не тамоксифена. Гены Хромосомы Рак. 49: 699–710. 2010. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    34

    Ерамян А., Морено-Буэно Г., Дольчет Х и др. al: Карцинома эндометрия: молекулярные изменения, вовлеченные в опухоль развитие и прогресс.Онкоген. 32: 403–413. 2013. Просмотр статьи: Google Scholar

    35

    Lagarda H, Catasus L, Arguelles R, Матиас-Гуйу X и Прат Дж .: мутации K-ras при карциномах эндометрия с микроспутниковой нестабильностью. J Pathol. 193: 193–199. 2001 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    36

    Сан Х., Эномото Т., Шройер К.Р. и др.: Клональный анализ и мутации в генах PTEN и K-ras в гиперплазия эндометрия.Diagn Mol Pathol. 11: 204–211. 2002 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    37

    Прасад М, Ван Х, Дуглас В, Баракат Р. Р. и Элленсон LH: Молекулярно-генетическая характеристика тамоксифен-ассоциированный рак эндометрия. Gynecol Oncol. 96: 25–31. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar

    38

    Турбинер Дж., Морено-Буэно Дж., Дахия С. и др. al: Клинико-патологический и молекулярный анализ эндометрия. карцинома, связанная с тамоксифеном.Мод Pathol. 21: 925–936. 2008 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    39

    Ясуэ А., Хасэгава К. и Удагава Ю.: Эффекты тамоксифена на эндометрий и его механизм канцерогенность. Hum Cell. 24: 65–73. 2011. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    40

    Хольц Д., Рамондетта Л. М., Берк Т. В., Палаццо JP, Dunton CJ, Atkinson EN и Broaddus RR: экспрессия PTEN в тамоксифен-ассоциированный рак эндометрия.Anticancer Res. 22: 2945–2948. 2002.

    41

    Валлен М., Томас Э, Висакорпи Т., Холли К. и Mäenpää J: Мутации эндометрия K-ras в груди в постменопаузе. онкологические пациенты, получавшие адъювантную терапию тамоксифеном или торемифеном. Cancer Chemother Pharmacol. 55: 343–346. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar

    42

    Хатисуга Т, Миякава Т, Цудзиока Х, Horiuchi S, Emoto M и Kawarabayashi T: мутация K-ras в полипы эндометрия, связанные с тамоксифеном.Рак. 98: 1890–1897. 2003 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    43

    Хатисуга Т., Цудзиока Х, Хориучи С., Удоу Т, Эмото М и Каварабаяши Т: мутация K-ras в эндометрии пациентов с раком молочной железы, принимающих тамоксифен, при сравнении тамоксифен и торемифен. Br J Рак. 92: 1098–1103. 2005 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    44

    Миранда С.П., Трайман П., Кандидо Э.Б. и др.: Экспрессия белков p53, Ki-67 и CD31 в полипах эндометрия женщин в постменопаузе, получавших тамоксифен.Int J Gynecol Рак. 20: 1525–1530. 2010.PubMed / NCBI

    45

    Бжозовский А.М., Пайк А.С., Даутер З. и др .: Молекулярные основы агонизма и антагонизма эстрогенов рецептор. Природа. 389: 753–758. 1997. Просмотр Статья: Google Scholar: PubMed / NCBI

    46

    Макдоннелл Д.П.: Молекулярные детерминанты фармакологии рецепторов эстрогенов. Maturitas. 48 (Дополнение 1): S7–12. 2004 г.Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    47

    Шах Ю.М. и Роуэн Б.Г.: киназа Src. Этот путь способствует действию агониста тамоксифена в эндометрии Исикавы клетки за счет фосфорилированной стабилизации эстрогена взаимодействие промотора рецептора (альфа) и повышенного уровня стероидного рецептора коактиватор 1 активность. Мол Эндокринол. 19: 732–748. 2005 г. Просмотр статьи: Google Scholar

    48

    Элкас Дж., Армстронг А., Поль Дж., Каттитта Ф., Мартинес А и Грей К. Модуляция стероидных рецепторов эндометрия и гены регуляции роста тамоксифеном.Obstet Gynecol. 95: 697–703. 2000. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    49

    Мехассеб М.К., Белл СК и Хабиба М.А.: эффекты тамоксифена и эстрадиола на дифференцировку миометрия и организация во время раннего развития матки у мышей CD1. Репродукция. 138: 341–350. 2009. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    50

    Линь С.Л., Ян Л.Й., Чжан ХТ и др.: ER-alpha36, вариант ER-alpha, способствует развитию агониста тамоксифена. действие на клетки рака эндометрия через MAPK / ERK и PI3K / Akt пути.PLoS One. 5: e010. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    51

    Filardo EJ, Quinn JA, Frackelton AR Jr и Bland KI: Действие эстрогена через рецептор, связанный с G-белком, GPR30: стимуляция аденилатциклазы и цАМФ-опосредованной ослабление рецептора эпидермального фактора роста к MAPK сигнальная ось. Мол Эндокринол. 16: 70–84. 2002. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    52

    Смит Х.О., Лесли К.К., Сингх М., Куоллс С.Р., Revankar CM, Joste NE и Prossnitz ER: GPR30: новый индикатор плохая выживаемость при раке эндометрия.Am J Obstet Gynecol. 196: 3862007. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    53

    Vivacqua A, Bonofiglio D, Recchia AG, Musti AM, Picard D, Andò S и Maggiolini M: связанный с белком G рецептор GPR30 опосредует пролиферативные эффекты, вызванные 17бета-эстрадиол и гидрокситамоксифен в клетках рака эндометрия. Мол Эндокринол. 20: 631–646. 2006. Просмотр статьи: Google Scholar

    54

    Игнатов Т., Эггеманн Х., Семчук А. и др .: Роль GPR30 в патологии эндометрия после тамоксифена для груди рак.Am J Obstet Gynecol. 203: 5952010. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    55

    Тамм-Розенштейн К., Симм Дж., Сухорущенко М., Салуметс А. и Метсис М.: Изменения в транскриптоме линия клеток рака эндометрия Ishikawa человека, индуцированная эстрогеном, прогестерон, тамоксифен и мифепристон (RU486), как обнаружено РНК-секвенирование. PLoS One. 8: e68

    13. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    56

    Pole JC, Gold LI, Orton T, Huby R и Кармайкл П.Л .: Изменения экспрессии генов, вызванные эстрогеном и селективные модуляторы рецепторов эстрогена у человека, выращенного в первичной культуре клетки эндометрия: сигналы, которые определяют канцероген для человека тамоксифен.Токсикология. 206: 91–109. 2005. Просмотр статьи: Google Scholar

    57

    Gielen SC, Santegoets LA, Ханифи-Могаддам P, Burger CW и Blok LJ: передача сигналов эстрогенами и тамоксифеном в эндометрий человека. J Стероид Biochem Mol Biol. 109: 219–223. 2008. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    58

    Ferguson SE, Olshen AB, Viale A, Awtrey CS, Barakat RR и Boyd J: Профилирование экспрессии генов тамоксифен-ассоциированный рак матки: доказательства двух молекулярных классы рака эндометрия.Gynecol Oncol. 92: 719–725. 2004 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    59

    Gielen SC, Kühne LC, Ewing PC, Blok LJ и Burger CW: Лечение рака груди тамоксифеном требует отчетливый профиль экспрессии генов на эндометрии человека: поисковое исследование. Endocr Relat Cancer. 12: 1037–1049. 2005 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    60

    Кларк Р., Кук К.Л., Ху Р. и др.: Стресс эндоплазматического ретикулума, развернутый белковый ответ, аутофагия и комплексная регуляция клеток рака груди судьба.Cancer Res. 72: 1321–1331. 2012.PubMed / NCBI

    61

    Повар К.Л., Шаджахан А.Н., Варри А., Джин Л., Hilakivi-Clarke LA и Clarke R: белок, регулируемый глюкозой 78 контролирует перекрестный обмен между апоптозом и аутофагией для определения антиэстрогеновая реакция. Cancer Res. 72: 3337–3349. 2012 г. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    62

    Гомес Б.П., Риггинс Р.Б., Шаджахан А.Н. и др .: Человеческий X-бокс-связывающий белок-1 обеспечивает независимость от эстрогена и устойчивость к антиэстрогенам в клеточных линиях рака молочной железы.FASEB J. 21: 4013–4027. 2007. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    63

    Тергас А.И., Буэлл-Гутброд Р., Гвин К. и др.: Клинико-патологическое сравнение рака эндометрия II типа на основе на воздействие тамоксифена. Gynecol Oncol. 127: 316–320. 2012. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    64

    Erdemoglu E, Güney M, Take G, Giray SG и Mungan T: RAD001 (Everolimus) Может предотвратить развитие тамоксифена. гиперплазия эндометрия и стромы.Int J Gynecol Cancer. 19: 375–379. 2009. Просмотр статьи: Google Scholar: PubMed / NCBI

    Канадская аптека: Купить Nolvadex онлайн

    Nolvadex Описание продукта


    Использование лекарств

    Nolvadex - это противоопухолевый агент, используемый для пероральной терапии рака груди на ранних стадиях у мужчин и женщин. Нолвадекс демонстрирует наиболее очевидный эффект при лечении рака молочной железы, положительного по рецепторам эстрогена. Кроме того, Nolvadex может быть показан для адъювантной терапии рака молочной железы без подмышечных узлов и рака молочной железы с положительным узлом у женщин, в следующих случаях:

    • лучевая терапия рака молочной железы
    • рассечение подмышечных лимфатических узлов (ALND)
    • частичное или полное удаление грудь

    Наиболее выраженный эффект Нолвадекса демонстрирует у женщин с 4 и более лимфатическими узлами в подмышечной впадине.Клинические исследования доказали, что Нолвадекс значительно снижает риск инвазивного рака груди у женщин с протоковой карциномой in situ (DCIS) и помогает снизить риск рака груди у всех групп пациентов.

    Суточная доза Нолвадекса может варьироваться от 20 до 40 мг. Продолжительность противоопухолевой терапии Нолвадексом может составлять до пяти лет.

    Пропущенная доза

    Если вы вспомнили, что пропустили прием Нолвадекса, примите его как можно скорее. Пропустите пропущенную дозу этого гормонального противоопухолевого лекарства, если уже почти пора принимать следующую таблетку.

    Дополнительная информация

    Таблетки Нолвадекса могут быть показаны женщинам в пременопаузе с метастатическим или местнораспространенным раком груди в качестве альтернативы облучению яичников или вместо хирургического удаления яичника.

    Хранение

    Не храните Нолвадекс при температуре выше 30 ° C. Рекомендуется хранить это гормональное противоопухолевое средство в оригинальной упаковке для защиты таблеток от света, влаги и тепла.

    Информация о безопасности Nolvadex


    Предупреждения

    Гиперкальциемия - один из редких, но серьезных побочных эффектов Nolvadex.При появлении каких-либо симптомов тяжелой гиперкальциемии (аритмия, потеря сознания, камни в почках) применение противоопухолевого препарата Нолвадекс следует немедленно прекратить.

    Заявление об ограничении ответственности

    Информация о раке груди, опубликованная в обзоре Нолвадекса, не должна рассматриваться как замена медицинской консультации онколога. Интернет-аптека категорически отказывается от всех обязательств любого рода за ущерб, полученный в результате использования информации, содержащейся в обзоре гормонального противоопухолевого средства Nolvadex.

    Нолвадекс Побочные эффекты


    Обычно Нолвадекс может вызывать легкие или умеренные побочные реакции, редко приводящие к отмене терапии гормональным противоопухолевым агентом. Частоту и интенсивность побочных реакций Нолвадекса можно контролировать, уменьшая дозировку препарата. Наиболее частыми побочными реакциями, вызываемыми Нолвадексом, являются следующие: рвота, тошнота или приливы. Иногда таблетки Нолвадекса могут вызывать гиперкальциемию, головокружение, нарушения менструального цикла, головокружение, алопецию, вагинальное кровотечение и периферические отеки.

    Синтез гибридов тамоксифен-артемизинин и эстроген-артемизинин, высокоэффективных против рака груди и простаты, ChemMedChem

    В поисках новых и эффективных методов лечения рака груди и простаты ряд гибридных соединений на основе тамоксифена, эстрогенов и артемизинина был успешно синтезирован и проанализирован на предмет их активности in vitro против простаты человека (PC-3) и рака груди (MCF). -7) клеточные линии.Большинство гибридных соединений проявляют сильную противоопухолевую активность против обеих линий раковых клеток - например, EC 50 (PC-3) до 1,07 мкМ и EC 50 (MCF-7) до 2,08 мкМ, что показывает более высокая активность, чем у их исходных соединений 4-гидрокситамоксифен (афимоксифен, 7 ; EC 50 = 75,1 (PC-3) и 19,3 мкМ (MCF-7)), дигидроартемизинин ( 2 ; EC 50 = 263,6 ( PC-3) и 49,3 мкМ (MCF-7)) и артесуновую кислоту ( 3 ; EC 50 = 195.1 (PC-3) и 32,0 мкМ (MCF-7)). Наиболее эффективными соединениями были гибриды эстроген-артемизинин 27 и 28 (EC 50 = 1,18 и 1,07 мкМ соответственно) против рака простаты и гибрид 23 (EC 50 = 2,08 мкМ) против рака груди. рак. Эти результаты демонстрируют высокий потенциал гибридизации артемизинина и эстрогенов для дальнейшего улучшения их противоопухолевой активности и создания синергетических эффектов между связанными фармакофорами.

    中文 翻译 :


    他 莫 昔 芬 - 青蒿素 和 雌 激素 - 青蒿素 杂种 的 合成 具有 很高 的 抗 乳腺癌 和 前列腺 癌 能力。

    寻找 新 的 有效 治疗 乳腺癌 和 前列腺 癌 的 方法 中 , 成功 合成 了 一系列 基于 他 芬 , 雌 激素 和 青蒿素 的 杂 , 并 分析 了 它们 (PC-3) 和乳腺癌 (MCF) 的 体外 活性 ‐7) 细胞 系。 大多数 杂 合 化合物 对 两种 癌细胞 都 出 强大 的 抗癌 活性 - 例如 , 低至 1.07 мкМ в EC 50 (PC-3) 和 低至 2,08 мкМ в EC 50 (MCF-7) - 显示 出 比 的 的 活性 4- 他 莫 7 ; EC 50 = 75,1 (PC-3) 和 19,3 мкм (MCF-7)) , 双氢 青蒿素 ( 2 ; EC 50 = 263,6 (PC-3) 和 49,3 мкм (MCF-7)) 和 青蒿 琥 酯 酸 ( 3 ; EC 50 = 195,1 (PC-3) 和 32,0 мкм (MCF-7)) 最 有效 的 化合物 是 抗 前列腺 的 雌 - 青蒿素 杂种 27 28 (EC 50 分别 为 1,18 和 1,07 мкм) 以及 抗 乳腺癌 的 杂种 23 (EC 50 = 2,08 мкм) 这些 发现 表明 , 青蒿素 和 杂交 具有 进一步 改善 并 在 相关 药效团 之间 产生 协同 作用 的 巨大 潜力。

    Ацинарные трансформированные протоковые клетки демонстрируют дифференциальную экспрессию муцина на мышиной модели протоковой аденокарциномы поджелудочной железы, индуцированной тамоксифеном | Биология Открыть

    Анализ

    ИГХ проводили со следующими антителами: антимышиным Muc1 (1: 200, клон # HMFG1, Abcam, ab70475), Muc5Ac (1: 400, клон 45M1, Abcam), Muc16 (1:10 000, синтез RS, Louisvile , KY, США), Ncoa3, pcJun и FoxM1, амилаза, CK19 (Santa Cruz Biotechnology, Калифорния, США) и Muc4 (1: 4000, поликлональный кролик 4A), последний был разработан в нашей лаборатории и разработан GenScript (Piscataway, Нью-Джерси, США).Как упоминалось выше, IHC-анализ проводился на ткани поджелудочной железы разных возрастных групп. Вкратце, после фиксации тканей формалином в течение 48 ч на предметные стекла помещали срезы толщиной 4 мкм. Срезы инкубировали в течение ночи при 56 ° C, а затем промывали ксилолом для удаления парафина. Срезы тканей регидратировали с уменьшающейся концентрацией этанола, а активность эндогенной пероксидазы гасили 5% H 2 0 2 в метаноле в течение 1 часа. Блокировка производилась с помощью 2.5% конская сыворотка на 2 ч. Первичные антитела инкубировали в течение ночи, а срезы тканей трижды промывали фосфатно-солевым буферным раствором (PBS), содержащим 0,05% Tween ® 20 (PBST). Добавляли универсальное вторичное антитело против мыши, конъюгированное с пероксидазой хрена, на 30 мин. После трех промывок PBST антитела к муцину были обнаружены с использованием 3,3'-диаминобензидина (DAB, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) перед контрастным окрашиванием гемотоксилином. Слайды обезвоживали с помощью возрастающих концентраций этанола с последующими двумя промываниями ксилолом и помещали в монтажную среду Permount (Fisher Scientific Fair Lawn, NJ, США).Слайды наблюдались и оценивались сертифицированным патологом. Дифференциальная экспрессия муцинов оценивалась от 0 до 3, где 0 считалось отрицательным; 1 - слабый; 2 - умеренный и 3 - сильный. Проценту положительных клеток для каждого соответствующего антитела присваивали балл по шкале от 1 до 4 (где 1, 0-25%; 2, 26-50%; 3, 51-75%; и 4, 76-100%). ). Общий балл (0–12) рассчитывали путем умножения значения интенсивности окрашивания на значение, представляющее процент положительных клеток (Rachagani et al., 2012б).

    .